2005年 · 第85卷第08期

自19世纪末Virchow将恶性肿瘤定义为局部组织细胞异常生长以来,癌症已被研究了一个多世纪.随着细胞生物学、分子生物学以及基因组学等基础研究的发展以及临床治疗方面的进步,对某些恶性肿瘤,如早期宫颈癌、乳腺癌、胃癌、结肠癌等已可达到根治;某些临床中期的癌症生存期也有显著提高。

目的 明确大鼠肺泡上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚单位编码基因(GCLC基因)负调控区域(-745～-705)上的功能元件E-box作用.方法利用迁移率变动试验(EMSA)和超级迁移率变动试验证实大鼠肺泡上皮细胞GCLC基因负调控区域的E-box元件能与转录因子USF1/USF2特异性的结合;通过共转染USF1/USF2表达质粒(pCMV-USF1/ pCMV-USF2)和GCLC-luc确认E-box元件在基因调控中的作用;最后通过构建USF1/USF2的逆转录病毒载体,将表达USF1/USF2的重组逆转录病毒感染肺泡上皮细胞, 用Western印迹检测细胞GCLC蛋白表达受影响的情况,进一步确定E-box元件与USF作用在GCLC基因表达中的最终作用.结果 EMSA和超级迁移率变动试验证实GCLC基因负调控区域的功能元件是E-box,且该元件与USF特异结合参与GCLC基因的调控;共转染USF1/USF2表达质粒的细胞GCLC基因表达明显下降;Western印迹证实感染重组USF1/USF2逆转录病毒使肺泡上皮细胞的GCLC蛋白表达明显下降.结论 E-box元件通过与转录因子USF作用抑制GCLC基因表达,E-box元件是γ-GCS基因的重要的抑制元件。

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)参与缺氧诱导因子-1(HIF-1)转录活性调节的机制.方法采用Western 印迹检测常氧及缺氧状态下磷酸化细胞外信号调节激酶ERK和总ERK在胃癌细胞系SGC7901中的表达;利用脂质体将正义真核表达载体及针对MKP-1的小干扰RNA载体转入SGC7901细胞;借助双荧光素酶基因报告系统(dual luciferase reporter, DLR)检测ERK通路抑制剂PD98059对SGC7901细胞中HIF-1转录活性的影响.结果 (1) 缺氧时磷酸化ERK在SGC7901中的含量增加,而总ERK的表达不变;(2) 缺氧12 h时不同浓度的PD98059 均能抑制HIF-1的转录活性;而p38通路抑制剂SB203580 对HIF-1的转录活性无影响;(3) 将针对MKP-1的小干扰RNA载体和空载体分别瞬时转入SGC7901细胞,转染24 h后, 缺氧12 h时磷酸化ERK在小干扰RNA载体转染细胞(U6M2)的表达高于空载体转染细胞(U6);(4)不同浓度的PD98059均能够抑制U6和U6M2细胞中HIF-1的转录活性,当PD98059浓度达50 μmol/L以上时,U6和U6M2细胞中HIF-1的转录活性差异无统计学意义.(5)不同浓度的PD98059均能够抑制U6和U6M2细胞血管内皮生长因子(VEGF)的产生,当PD98059浓度达50 μmol/L以上时,VEGF的分泌量在U6和U6M2细胞中差异无统计学意义.结论在胃癌细胞系SGC7901中,缺氧时MKP-1通过灭活ERK的途径参与HIF-1转录活性的调节。

目的 研究一氧化氮合酶(NOS)抑制剂Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)对反复高热惊厥(FS)大鼠海马血红素氧合酶-1(HO-1) mRNA和蛋白表达及一氧化碳(CO)含量的影响,以探讨一氧化氮(NO)对HO/CO体系的调节作用.方法采用热水浴诱导大鼠FS.将发育期大鼠随机分为3组:对照组,FS组和FS + L-NAME组.分光光度计间接测定血浆NO和CO含量;核酸原位杂交法检测海马神经元HO-1 mRNA表达;Western 印迹方法检测海马神经元HO-1蛋白含量.结果与对照组比较,反复FS后海马神经元HO-1 mRNA表达明显增高,HO-1蛋白含量升高208%(P<0.01),血浆CO含量增高94.57%(P<0.01).用L-NAME干预FS,血浆NO含量下降13.79%(P<0.05),海马HO-1 mRNA表达明显下降,HO-1蛋白表达下降30.19%(P<0.01),血浆CO含量下降16.14%(P<0.05).结论反复FS时,外源性给予NOS抑制剂可降低NO含量,同时引起HO-1的基因表达及CO含量下降。

目的 构建针对血管内皮生长因子(VEGF)的短发夹环RNA(shRNA)质粒(pEGFP-H1/VEGF),观察其在体内和体外对胶质瘤细胞株U251生长的抑制作用.方法应用PCR构建携带绿色荧光蛋白(EGFP)基因的RNA干扰真核表达载体pEGFP-H1,并利用该载体介导VEGF shRNA.用阳离子脂质体转染U251细胞,通过荧光显微镜和流式细胞仪观察EGFP的表达,用RT-PCR检测VEGF mRNA的表达,以酶联免疫吸附实验(ELISA)检测培养液中VEGF蛋白的含量.同时筛选转染pEGFP-H1和pEGFP-H1/VEGF的U251稳定细胞株,制备裸鼠U251细胞移植瘤模型,观察肿瘤生长情况.结果与空载体转染组相比, pEGFP-H1/VEGF对VEGF的抑制率达77.9%.对照组和pEGFP-H1组裸鼠肿瘤重量分别为1.7 g±0.4 g和1.5 g±0.7 g,体积分别为1573 mm3±330 mm3和1430 mm3±382 mm3,两组之间重量和体积差异均无统计学意义(P>0.05),而pEGFP-H1/VEGF组肿瘤重量为0.5 g±0.4 g,体积为401 mm3±272 mm3,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 pEGFP-H1介导的VEGF shRNA能有效抑制U251细胞中VEGF的表达,并在体内抑制肿瘤生长。

目的 探讨重组1、2型腺相关病毒(rAAV1和rAAV2)载体经不同途径向大鼠脑转入增强绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的表达情况,选择更加适于中枢神经系统(CNS)转基因治疗的rAAV血清型和可行的基因转入途径.方法将24只雄性健康成年SD大鼠随机分为4组:rAAV1海马注射组、rAAV1脑室注射组、rAAV2海马注射组和rAAV2脑室注射组,每组6只大鼠.对每组大鼠立体定向注射剂量和滴度相匹配的rAAV1-EGFP和rAAV2-EGFP载体,分别于注射后2周和4周处死大鼠取脑,行序列冰冻切片并以荧光显微镜观察EGFP在脑内的表达情况,计算EGFP在脑的表达体积.结果 2周时各组小鼠EGFP表达量少或无表达,差异无统计学意义;4周时rAAV1海马注射组表达体积为(7.00±0.98)mm3,rAAV2海马注射表达体积为(0.81±0.28)mm3(P<0.01);4周时AAV1脑室注射组表达体积为(12.72±0.28)mm3,烫AAV2脑室注射组表达体积为(0.24±0.13)mm3(P<0.001).结论在CNS中rAAV1是一种比rAAV2更为优越的转基因载体,rAAV1可通过脑室内注射途径在CNS高表达,并可直接转导胶质细胞。

目的 评价新生儿期先天性甲状腺功能减退症(CH)患儿的左心收缩和舒张功能改变,以及甲状腺素替代治疗后的左心功能变化,并探讨其与血甲状腺激素水平的相关性.方法对40例CH新生儿分别以左旋甲状腺素(L-T4)为起始量4～8 μg ·kg-1·d-1治疗1个月,治疗前后与30例对照组均进行超声心动图检查,测量左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、二尖瓣口血流舒张早期峰值速度(Em)、二尖瓣口血流舒张晚期峰值速度(Am)、二尖瓣环收缩期运动峰值速度(sm)、二尖瓣环舒张早期运动峰值速度(em)、二尖瓣环舒张晚期运动峰值速度(am)、收缩期二尖瓣环下移距离(MAD),同时用化学发光法测定血总三碘甲状腺原氨酸(TT3)、总四碘甲状腺原氨酸(TT4)和促甲状腺激素(TSH),并对血甲状腺激素水平和心功能指标行相关性分析.结果 CH组替代治疗前左心功能指标LVEF、sm、MAD、Em和em为0.61±0.08、2.60 cm/s±0.60 cm/s、0.29 cm±0.06 cm、0.59 m/s±0.12 m/s和2.72 cm/s±1.43 cm/s,对照组上述指标较低,分别为0.67±0.06、3.25 cm/s±0.51 cm/s、0.41 cm±0.08 cm、0.72 m/s±0.11 m/s和4.51 cm/s±1.23 cm/s(与CH组比较P<0.01);CH组用L-T4替代治疗1个月后,上述指标分别为0.69±0.05、3.46 cm/s±0.64 cm/s、0.45 cm±0.08 cm、0.82 m/s±0.17 m/s和5.09 cm/s±1.37 cm/s,较治疗前显著上升(P<0.01).相关分析显示左心功能指标LVEF、LVFS、sm、MAD及Em、Em/Am、em、em/am与TT4呈正相关(P<0.01),与TSH呈负相关(P<0.01),其中MAD、sm、Em、em与血TT4、TSH水平的相关性最好(r=0.667,r=0.538,r=0.478,r=0.599,P<0.01;r=-0.670,r=-0.521,r=-0.490,r=-0.583,P<0.01).结论先天性甲状腺功能减退症新生儿常伴有左心功能下降,收缩功能和舒张功能均累及,早期进行L-T4替代治疗可尽早改善受损的左心功能。

目的 探讨趋化因子在类风湿关节炎(RA)中的作用及其血清水平与临床指标关系.方法采用酶联免疫吸附方法检测58例活动期RA患者、29例缓解期RA患者,21例骨关节炎患者及20名健康人血清白介素(IL)-8、γ干扰素诱生蛋白(IP)-10和由正常T细胞表达和分泌,活化时被调节的蛋白质(RANTES)的水平.结果活动期RA患者的IL-8、IP-10和RANTES水平明显高于健康对照组(P<0.01)和骨关节炎组(P≤0.01);活动期RA患者IP-10的水平明显高于缓解期RA患者(P=0.01);活动期RA患者的(IL-8)/(IP-10)×(RANTES)/(IP-10)值高于健康对照组(P=0.01);血清RANTES水平与红细胞沉降率、C反应蛋白、血小板和关节肿胀数正相关,与血红蛋白负相关.血清IP-10水平与手关节X线影像学分期呈负相关.结论活动期RA患者IL-8、IP-10和RANTES水平明显升高,RANTES可作为观察病情活动性的指标,IP-10可作为评估预后的指标。

目的 建立一种与体内环境相似的新模型,用以更好地评价和比较抗真菌药物的抗真菌活性.方法将21名健康志愿者随机分为两组,第1组11例,口服伊曲康唑200乙mg,每日2次,用药1周;第2组10例,口服伊曲康唑200 mg,每日1次,用药1周.两组对象于服药前、后1、4、7、10、14、21、28、35 d分别制备皮肤角质层剥离条作为培养基,将红色毛癣菌、须癣毛癣菌和犬小孢子菌孢子的菌悬液接种于皮肤角质层剥离条的中央,培养1周,常规行PAS染色,采用角质层真菌定量生物分析法,并用计算机辅助图像分析测定被皮肤癣菌的菌丝所覆盖的面积.结果 3种皮肤癣菌在人体皮肤角质层剥离条上均可生长,服药前被菌丝覆盖的面积稠密,随着服药时间的延长,菌丝面积逐渐减少,即服用伊曲康唑后真菌的生长受到抑制,至服药第7天降至最低;服药第10天菌丝面积开始随时间的延长而增多,至第35天增至最多.两种剂量的伊曲康唑对3种皮肤癣菌均显示了明显的抗真菌活性,但两组间差异无统计学意义(P>0.05).结论真菌在人体角质层剥离条上的生长环境与人体内环境相似,伊曲康唑在人体角质层显示了很高的抗皮肤癣菌的活性.角质层真菌定量生物学分析法是介于体外试验与体内疗效之间的一种新方法的有效尝试。

目的 研究严重急性呼吸综合征(SARS)患者血清中抗SARS冠状病毒(SARS-CoV)核壳蛋白(N)及刺突蛋白(S) S1区特异性抗体的产生规律,评价这两种蛋白在SARS诊断研究中的作用.方法采用ELISA法检测86例确诊SARS患者血清中针对N和S1蛋白IgG(N-IgG和S1-IgG),并与SARS-CoV IgG水平进行比较.结果两种蛋白的特异性抗体的阳性率均随着病程的延长而增高.N-IgG在发病第1周检出阳性率为14%(6/44),第2周为56%(10/18),第3周达到100%(24/24);S1-IgG第1周检出阳性率为5%(2/44),第2周为39%(7/18),第3周阳性率达到83%(20/24).两种蛋白抗体的检测结果分别与SARS-CoV IgG结果比较,检测符合率分别为88%(76/86)和83%(71/86).结合免疫印迹和ELISA两种方法检出正常人群SARS-CoV N-IgG阳性率为1.88%(14/745).结论 SARS-CoV N和S1重组蛋白对于SARS诊断试剂的研究具有重要价值。

目的 探讨脐带血干细胞移植对假肥大型肌营养不良症(DMD)治疗的可行性.方法对1例确诊为有家族史的11岁DMD患儿经HLA配型,在脐血库中寻找到1份有5个位点相合的干细胞,其细胞数为移植治疗用量的2.6倍.采用白消安、环磷酰胺和兔抗胸腺淋巴细胞球蛋白预处理后进行异基因脐带血干细胞移植治疗;术后给予环孢素A、泼尼松龙和骁悉预防移植物抗宿主反应,前列腺素E1预防肝静脉阻塞综合征,丽科伟预防巨细胞病毒感染,粒细胞刺激因子惠尔血和丙种球蛋白进行对症支持治疗,定期检测血清肌酸激酶(CK)、造血重建、血型转变和PCR-STR.结果移植后第12天外周血白细胞为0.5×109/L,第14天1.0×109/L,中性粒细胞数为0.6×109/L,第37天停用粒细胞刺激因子,白细胞波动在 3.34×109/L ～12.2×109/L;第27天血小板 >20×109/L,血红蛋白于第24天上升至88 g/L,停用红细胞输注.移植后第42天患儿的血型从移植前的A型转变为AB型(移植干细胞为B型);PCR-STR检测均呈混合嵌入,供者的比例逐渐上升至55%～65%.第38天出现Ⅰ度移植物抗宿主病,CK从6000 U/L降至600～2200 U/L.移植后第42天的运动功能较移植前有所改善.结论异基因脐带血干细胞移植后短期内可恢复造血重建并改善患儿的运动功能.

社区卫生服务是公共卫生体系和医疗服务体系的基础,积极发展社区卫生服务是维护公共健康安全,改善卫生公平的需要[1].我院从2000年6月建立社区卫生服务科,旨在探讨以社区卫生服务为基础,实现社区卫生服务与医院、疾病预防控制中心合理分工的新型卫生服务体系,把群众的预防保健和基础医疗在社区有效、经济地解决,满足广大群众、特别是低收入群众基础医疗需求。

近年来,临床医疗决策十分强调遵循科学的证据,即循证医学.临床学家和研究者一直以来也在不懈地创造最佳证据,并制定指导临床实践的诊治指南.然而,在应用证据治疗疾病的过程中,由于患者年龄、性别、种族、个体差异以及社会文化诸多因素的影响,药物选择与不合理使用的现状极为严重,药害已威胁到人类健康与生命安全.为此,1985年世界卫生组织(WHO)合理用药专家委员会提出了"临床合理用药"概念并将其在世界各国推广[1],又资助建立了合理用药国际网络(INRUD),致力于促进全球尤其是发展中国家的合理用药。

例1 患者男,61岁,因突发头痛伴意识障碍2 h在院外住院.院外CT示蛛网膜下腔出血,治疗3周后患者意识清楚,仍有明显头痛.经院外医师推荐于2004年7月26日转我院诊治.入院体格检查:生命征正常,意识清楚,颅神经(-),四肢活动自如.入院初步诊断: 蛛网膜下腔出血(动脉瘤?). 我院行数字减影血管造影(DSA)检查发现左侧颈内动脉造影正位像(图1A)示左侧鸡冠处有一个2 cm×1cm的动静脉畸形,供血动脉不清楚,引流静脉经额部皮质静脉引流到上矢状窦。

患者女,58岁,2004年3月29日因头痛3年入院,且左侧卧位时头痛加重.入院体格检查:颅骨X线平片可见右侧岩骨上有一高密度类圆形影(图1)。

5-氟尿嘧啶(5-FU)应用于临床胃肠道肿瘤的单用反应率低不超过20%[1].氟尿嘧啶类化疗药均需要在胸苷磷酸化酶(TP)的作用下转化为活性代谢产物发挥抗肿瘤活性。

基质金属蛋白酶(MMP)是参与细胞外基质降解的最主要酶类,对维持细胞外基质的动态平衡、炎症性疾病、胚胎发育、细胞凋亡、组织重建以及肿瘤浸润、转移等生理或病理过程有重要的作用[1-3].MMP-9是MMP家族的重要成员,它与肺损伤有关[4].体外循环常导致急性肺损伤,通过动物实验发现体外循环可引起支气管肺泡灌洗液中MMP-9浓度升高[5].本研究拟从基因和蛋白质水平观察体外循环对人MMP-9的影响。

当前经蝶垂体瘤手术是应用最多的手术入路.现有经鼻-蝶窦入路主要有:经唇下切口-鼻中隔-蝶窦入路、经鼻前庭-鼻中隔-蝶窦入路、经鼻腔直接经蝶入路.后者是近几年随着手术器械和操作技术的发展而趋于成熟的手术方法,已被越来越多的神经外科医师所采用.该入路创伤小,但双瓣鼻窥器管径小,手术操作空间小,操作技术要求高,且手术显微镜调整直视区的范围受到限制.为充分发挥其优点、避免其不足,我院采用内镜辅助单鼻腔直接经蝶垂体瘤手术,取得了满意的效果.为对其临床疗效进行综合正确评估,结合本院近年病例前瞻性设计比较研究上述3种经鼻-蝶窦入路临床指标,现报道如下。

[编者按] 早产儿视网膜病也是引起产科医疗纠纷的严重并发症之一,处理不好会导致患儿出现终生残疾.为了减少早产儿视网膜病的发生,以及降低早产儿视网膜病发生后对患儿的伤害,本刊特邀请了中华医学会围产学分会会副主任委员,上海市第一妇婴保健院妇产科专家段涛教授和复旦大学附属儿科医院新生儿专家陈超教授就早产儿视网膜病防治方面的问题进行详细地介绍.为了使文章可读性强,生动、活泼,与前几期讲座一样,此讲仍然采用的是一问一答的对话形式。

科学家们已经发现,尽管人类食用的植物种类很多,但引起食物过敏的只有少数.但是,他们之间的相互联系尚不清楚.由于蛋白质都是由氨基酸组成,先期的研究已着眼于通过分析氨基酸的序列从而找出可能的过敏原.然而,这样可能会产生错误的结论.因为仅仅通过氨基酸的序列并不能提示氨基酸如何通过相互作用成为有特异性结构的蛋白质.目前,应用计算机3D模式不仅可以用来研究植物蛋白表面的氨基酸序列的相似性,而且可以对其结构的相似性进行研究。