2005年 · 第85卷第07期

急性白血病的治疗经过几代人历经数十年的努力,取得了显著的进展,疾病治疗的完全缓解率和患者生存时间显著延长,治疗方法也从单纯的细胞毒药物治疗向多元化联合治疗的方向发展。

造血干细胞移植是血液恶性疾病的有效治疗手段,但其前提是找到合适的供者.几十年来,供者来源困难一直是限制本项技术广泛应用的技术瓶颈.为此,全世界造血干细胞移植工作者致力于从多方面、多层次解决此问题。

急性白血病是一组克隆性造血干细胞疾病,恶性克隆的细胞生物学行为异常主要体现在干细胞分化受阻、增殖过度和凋亡耐受.过去20年,对急性白血病基本治疗主要手段仍是化疗,除了化疗药物的毒副反应外,5年存活率(<60岁患者)仍停留在约30%的病例.因此,研发毒性低、特异性高的抗白血病药物成为近10年来的重要目标.目前认为,白血病细胞增殖优势的分子机制与其不断地接受有丝分裂信号刺激有关;这类促分裂信号分子包括多种不同的蛋白质,构成了所谓"信号转导瀑布".针对白血病细胞异常的信号转导途径,设计"阻断"或"沉默"白血病相关信号转导通路的分子靶向药物.有望成为急性白血病治疗领域又一革命性的手段。

砷用于治疗白血病的历史可以追溯到二千年前,但由于毒性较大且疗效相对较低,其真实的价值一直未能体现.直到二千年后的今天,随着三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)所取得的巨大成功,这个古老的药物又重获新生,受到世人的瞩目.越来越多的研究表明,砷剂不仅是一种安全有效的药物,而且在恶性肿瘤,特别是白血病的治疗中具有极大的潜力[1]。

靶向药物治疗是当今肿瘤治疗的一次革命.造血细胞癌变后其细胞表面表达特征性抗原分子,依此作为"靶点",应用特异性单克隆抗体(单抗)与其结合,通过抗体介导的细胞毒作用(ADCC)或补体介导的细胞毒作用(CDC)及诱导细胞调亡的机制杀灭肿瘤细胞,产生"生物导弹"样效应.近年来,抗CD20单抗(美罗华、Zevalin)治疗B细胞非霍杰金淋巴瘤的成功经验引发了应用单抗治疗白血病的研究热潮。

目的 了解中国慢性肾脏病(CKD)患者心血管疾病(CVD)的发病规律和发病因素.方法对我国5个省市、自治区7家三级甲等医院2002年至2003年收治的1239例慢性肾脏病患者进行流行病学调查.结果 (1)慢性肾脏病患者冠状动脉疾病(CAD)的患病率为16.5%,左心室肥厚(LVH)为58.5%,充血性心力衰竭(CHF)27.7%,脑卒中(CVA)5.6%,大血管动脉粥样硬化性病变31.5%.(2)第2～3期轻度慢性肾脏病患者的CAD(5.9%)和CVA(1.0%)患病率已明显高于同地区一般人群;高达41.2%的轻度肾功能减退患者合并LVH,13.8%有充血性心衰的临床证据;CAD、LVH和CHF的患病率随肾功能恶化而增高.(3)本组透析患者CAD的患病率(20.0%)低于欧美国家,而脑卒中患病率(5.4%)显著高于国外报告;不同年龄组、不同地区和糖尿病与非糖尿病慢性肾脏病之间CAD的患病率存在差异;但男、女两性之间无明显差异,女性LVH的患病率甚至高于男性.结论慢性肾脏病患者是心血管疾病的高发人群,轻度慢性肾脏病患者心血管疾病的危险性已明显增加.本组透析病人CAD的患病率低于欧美国家,发病规律也与一般人群有别,故有必要深入研究慢性肾脏病患病人群心血管疾病的发病机制和危险因素。

目的 探讨羊水细胞作为一种新的组织工程种子细胞的可能性.方法通过羊膜腔穿刺取得人孕16～23周的羊水,分离细胞,在添加10%胎牛血清(FBS)的F10培养液中,体外培养传代,观察其生物学特性.免疫细胞化学方法检测细胞的标准中间丝蛋白,分析细胞性质.收集第4代细胞,种植到PGA生物支架上,通过倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞的黏附、生长情况.结果羊水细胞在体外培养体系中增殖迅速.免疫细胞化学显示波纹蛋白、α-平滑肌肌动蛋白、广谱角蛋白阳性;肌间线蛋白阴性,与间质细胞类似.羊水细胞能紧密的黏附在PGA生物支架上,呈汇合性生长,未发现细胞死亡的迹象.结论羊水细胞增殖能力强,表现间质细胞的特性,和生物支架有良好的相容性,具有作为组织工程种子细胞所需的条件。

目的 观察端粒酶逆转录酶(Htert) 启动子调控的肿瘤增殖腺病毒CNHK300对肝癌细胞的杀伤作用.方法采用Western 印迹检测了腺病毒E1A在细胞中的表达;通过病毒增殖实验和细胞生长抑制实验,验证CNHK300选择性复制和杀伤能力,并与ONYX-015(E1B 5 5000蛋白缺失的2型和5型嵌和型腺病毒)和wtAd5(野生型腺病毒)进行比较;用携带绿色荧光蛋白的CNHK300-EGFP感染BJ和Hep3B,直观的观察其增殖过程.结果 CNHK300病毒48 h在Hep3B 和HepGII中的增殖倍数分别为40 625和65 326倍,与wtAd5增殖能力相近,较ONYX-015强几倍至十几倍.在BJ正常成纤维细胞中CNHK300病毒增殖能力减弱,CNHK300病毒48 h增殖倍数为180倍,而wtAd5增殖能力仍可高达4000倍.CNHK300在 MOI 0.5集落形成单位/细胞以下就可以有效地杀伤肝癌细胞, MOI 0.002 集落形成单位/细胞时就可以杀伤半数Hep3B细胞,较ONYX-015具有更强的肿瘤杀伤能力.CNHK300对正常成纤维细胞的杀伤力明显弱于wtAd5, CNHK300在MOI100集落形成单位/细胞时BJ细胞存活率近50%.结论肿瘤选择性增殖腺病毒CNHK300可选择性地在端粒酶阳性的肝癌细胞中复制,并产生溶瘤作用,在正常细胞中复制能力和杀伤能力明显减弱,且无论选择性和杀伤能力均优于ONYX-015。

目的 探讨VEGF165基因转染血管内皮祖细胞(EPCs)移植促进缺血皮瓣的血管新生,提高皮瓣存活率.方法体外分离、培养人脐血中EPCs,利用脂质体介导血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)基因体外转染EPCs,然后移植于裸鼠随意皮瓣,皮瓣早期断蒂.结果脐血中分离培养的EPCs表达CD34、KDR及CD133,VEGF165基因转染EPCs体外及体内检测均有VEGF165蛋白的表达.转染VEGF165基因的EPCs组和EPCs组移植裸鼠皮瓣后,EPCs整合到缺血部位新生血管中,与对照组的皮瓣存活率分别为97.2%±2.8%、60.3%±2.1%、34.2%±1.8%(P＜0.05),而且前二组毛细血管密度、血流灌注差异均有统计学意义(P＜0.05),较对照组均有明显改善(P＜0.05).术后第7 d时三组皮瓣中的EPCs密度分别为136个/ mm2±10个/ mm2、75个/ mm2±6个/ mm2、0个/ mm2(P＜0.05); 第11天时EPCs密度分别为305个/ mm2±26个/ mm2、199个/ mm2±18个/ mm2、0个/ mm2(P＜0.05).结论脐血中的EPCs体外培养后移植体内可促进缺血皮瓣的血管新生,提高存活率,而转染VEGF165基因的EPCs具有更强大的促血管新生的作用。

目的 探讨人p53四价功能域在提高抗体功能性亲和力和生物学活性方面的的作用.方法利用基因克隆技术,将人IgG3上游铰链区/p53四价功能域融合基因与前列腺癌/抗CD3双特异性单链抗体基因融合,构建多价抗体(mBsAb),测序正确后,将其亚克隆入真核表达载体进行表达,纯化表达产物,并利用流式细胞仪及51Cr释放试验进行生物学活性测定.结果经酶切、测序分析证实mBsAb构建成功,其真核表达产物分泌于细胞培养上清,相对分子量为67 000,mBsAb与PBMC和PC-3细胞的阳性结合率分别为70.4%和81%,明显高于BsAb组.51Cr释放试验结果显示, mBsAb激活的T细胞可以裂解PC-3细胞,裂解百分率明显高于IL-2组和BsAb组.结论人IgG3上游铰链区/p53四价功能域基因与抗前列腺癌/抗人CD3双特异性单链抗体基因融合后表达产物的功能性亲和力和生物学活性大大提高,为提高抗体的功能性亲和力和生物学活性开辟了新的思路。

目的 寻找Toll样受体4(TLR4)新的配体,探讨热休克蛋白70(HSP70)与TLR4的相互关系.方法收集人单核细胞体外培养,加入终浓度5.0 μg/ml HSP70,分别于加入后0、30、60、120 min中止刺激,免疫组化检测核因子-κB (NF-κB);加入不同浓度TLR4阻断剂孵育后,予HSP70刺激,120 min后检测NF-κB.用流式细胞术检测HSP70刺激后单核细胞膜TLR4受体数目的变化.同时用ELISA法检测加不同浓度TLR4阻断剂后上清液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度.结果HSP70可刺激单核细胞NF-κB核移位,TLR4阻断剂可阻断HSP70这一效应.HSP70的刺激可导致单核细胞膜TLR4受体数目显著下调.HSP70刺激单核细胞引起上清液TNF-α浓度增加,加入TLR4阻断剂可显著降低TNF-α浓度. 结论 HSP70可通过细胞膜TLR4转导信号,是TLR4的内源性配体。

目的 探讨白血病患者接受异基因骨髓移植(allo-BMT)后骨髓中WT1的动态表达水平在监测微小残留病(MRD)中的意义.方法建立实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,采用LightCycler PCR仪检测了15例白血病患者allo-BMT前后(111例次)和23例非白血病患者骨髓中WT1及内参GAPDH的表达水平,以WT1N =(WT1拷贝数/GAPDH拷贝数)×104 计算WT1表达水平.结果初诊与复发白血病患者骨髓中WT1N的中位表达水平分别为40.18和125.89,明显高于完全缓解组和对照组(分别为4.80和1.47),对照组与完全缓解组之间及初诊与复发组之间差异无统计学意义;动态检测WT1N变化与相应融合基因变化具有很好的相关性, WT1N 表达水平再次升高可提前40～180 d预示白血病临床复发.结论实时定量RT-PCR动态检测WT1在白血病患者allo-BMT后骨髓中表达水平,可作为监测残留病的指标,提示复发。

目的 确定高嗜酸性粒细胞综合征(HES)是否存在Janus酪氨酸激酶/信号传导与转录激活因子(JAK/STAT)信号途径的激活;进一步揭示HES的发病机制,并动态观察1例HES患者对甲磺酸伊马替尼(格列卫)治疗的临床反应及JAK/STAT蛋白质和FIP1L1-PDGFRA融合基因的变化.方法用Western印迹技术检测4例HES患者(3例FIP1L1-PDGRA阳性,1例阴性),患者粒细胞中JAK2、STAT3及磷酸化STAT5(P-STAT5)蛋白质表达水平;对1例FIP1L1- PDGFRA融合基因阳性的HES患者口服小剂量格列卫治疗,用逆转录(RT)-筑巢聚合酶链反应(PCR)及Western印迹技术动态检测格列卫治疗前、治疗后10、30、60 d患者粒细胞的FIP1L1-PDGFRA融合基因及JAK2、STAT3、STAT5及P-STAT5的表达.结果 FIP1L1-PDGFRA融合基因阳性的3例HES患者均有JAK2,STAT3及P-STAT5蛋白质表达的显著上调;而1例FIP1L1-PDGFRA阴性的HES患者上述蛋白表达几乎阴性.其中1例FIP1L1-PDGFRA(+)的HES患者服用小剂量格列卫治疗后,达到持续性血液学缓解(血象及嗜酸性粒细胞比例恢复正常,症状体征消失);服药30 d后FIP1L1-PDGFRA融合基因的表达量明显减低,60 d后融合基因表达阴性;JAK2、STAT3、STAT5及P-STAT5蛋白质表达呈时间依赖性下调,60 d后表达均阴性.结论 HES患者粒细胞存在JAK/STAT信号途径的过度激活,其活化可能与HES患者嗜酸性粒细胞的恶性增殖有关.小剂量格列卫治疗HES具有明显效果,可使FIP1L1-PDGFR(+)的HES患者达到完全的血液学及分子遗传学缓解。

目的 探讨实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)在监测慢性粒细胞白血病(慢粒)患者微小残留病变、考核疗效以及预测疾病预后方面的应用.方法应用实时定量RT-PCR对11例慢粒患者治疗前后融合基因(BCR-ABL)转录本水平的变化进行监测,对55例不同病期患者之间的转录本水平进行比较.结果对于慢性期患者,造血干细胞移植后其BCR-ABL转录本水平明显下降,甚至检测不到,甲磺酸伊马替尼(格列卫)治疗可获得类似结果,而羟基脲、干扰素α或三尖杉酯碱治疗后,其BCR-ABL转录本水平虽有下降但仍维持在较高水平;患者发生急变时,其BCR-ABL转录本水平升高约10倍;急变期患者的转录本水平明显高于慢性期或加速期患者.结论实时定量RT-PCR方法准确可靠,对于监测慢粒患者的微小残留病变、考核疗效以及预测慢粒急变具有重要的临床应用价值。

孕妇30岁,孕2产0,现孕26周3 d,来湘雅二医院常规体检,超声所见,位置:ROA,胎儿头颅环状回声完整,BPD:63 mm,脊柱呈成角畸形,腰椎明显侧凸约90度(图1),胎儿腹壁脐部有一约40 mm的缺损,腹腔内的肝脏、脾脏、双肾及全部肠管、部分膀胱通过缺损口向外膨出,其外周包裹一层透明薄膜, 膨出的内脏靠近胎盘(图2),仅见一根较短的脐带与之相连,且为单脐动脉(图3).左肾集合系统可见明显液性分离宽约10 mm.

病历摘要 　　患者男,46岁,工人.因腹胀、消瘦5个月,呕吐3个月,发热3 d入院.腹水检查见多量单核细胞,腹水结核菌素(PPD)-IgG(+), 拟"结核性腹膜炎"予正规抗结核治疗2个月,效果欠佳.3个月前曾到当地医院诊治,腹部CT发现大量腹水,盆腔多个囊状肿物,考虑腹腔肿瘤(囊腺性肿瘤转移?)。

过去的20年间分子生物学与细胞生物学技术的飞速发展对整个生物医学产生了重大影响,其影响也渗透到医学影像学中,加之转基因动物的大量涌现,在活体研究小动物疾病的分子事件日益成为许多学科包括药理学科在内的迫切要求.分子影像学就在这种形式下应运而生,它将分子生物学技术和现代医学影像学密切结合,在分子或细胞水平上研究活体生命或疾病过程的特定分子事件.过去的几年间,分子影像学有了长足发展,利用正电子发射断层成像(positron emission tomography,PET)、磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)和光学成像技术已可在动物模型中发现转基因的表达、胚胎发育、追踪单个细胞的运动、检出微小肿瘤及疾病特定的分子过程,如凋亡或血管生成等[1,2].心血管系统的分子影像学也取得了很大进展,尤其是分子影像学探针的开发与应用体现出有用的价值,不同的靶向探针已开发用于不同的分子事件如纤维蛋白、凝血因子13、凋亡、血管生成等的成像[3-7].本文讲述心血管系统分子影像学的基本原则及其应用前景。

由中华医学会外科学分会、湖北省医学会、<临床外科杂志>联合主办的"中国临床普外科前沿与争论高峰论坛"会议于2004年11月26日至28日在武汉举行.裘法祖院士、吴孟超院士、吴咸中院士、黄志强院士、黎介寿院士、郑树森院士、刘允怡院士、著名外科专家吴蔚然教授、朱预教授、张圣道教授、香港地区的范上达教授、台湾地区的彭芳谷教授到会并分别作了精彩的主题演讲;中华医学会外科学分会主任委员杜如昱教授及其他副主委、普外科各专业组组长及来自全国各地的120名普外科界代表参加了本次大会.

段涛教授:您在治疗产科臂丛神经损伤方面手术的成功率高于国内的同行,您有什么经验和体会? 　　陈亮教授:对产瘫的手术治疗已有百余年历史.由于长期以来其被当作缩小了的成人臂丛神经损伤而采用成人的手术方式,因此疗效一直不理想.近20年来,随着显微解剖学、神经生物学、病理学及显微外科学的发展,人们已逐渐认识到产瘫有其独特的损伤及转归规律,进而提出了一系列有针对性的治疗方法.我们医院在顾玉东院士的带领下,从20世纪90年代初开始,对产瘫进行了全方位的基础和临床研究,特别对创伤性神经瘤和后期主动肌拮抗肌同步收缩的机理进行了深入的探讨.我们的经验是:产瘫的臂丛创伤性神经瘤即使有传导性,其神经结构已遭严重破坏,应切除重建;若有早期手术指征而未行神经探查,则在自然恢复过程中患肢会出现明显的主动、拮抗肌同步收缩,从而出现一系列后遗症.因此,对产瘫的手术原则为:对有早期神经探查指征患者(术后3个月无屈肘)作神经瘤切除、神经移植及移位术;对神经根撕脱患者行丛外神经移位;对保守治疗无效的肩关节内旋挛缩应尽早松解;患儿2岁后可进行功能重建手术.此外,规范的康复训练能明显改善手术和非手术患儿的预后.我认为,只要遵从这些治疗原则,产瘫的预后就能得到很大的改善。

胎鼠皮肤创面无瘢痕愈合发生在特定的妊娠时期[1].胎鼠这种无瘢痕愈合的发生机理尚不清楚,为此本研究利用基因微矩阵芯片技术的信息集约化、平行处理、高效、快速和多参量等特点[2],大规模筛选无瘢痕形成的早期妊娠胎鼠和有瘢痕形成的晚期妊娠胎鼠皮肤间基因表达的差异,以探讨胎鼠皮肤无瘢痕形成的机理。

代谢综合征(MS)以多重心血管危险因素聚集为特征,1999年世界卫生组织(WHO)和2001年美国国家胆固醇教育计划成人治疗组(NCEP-ATPⅢ)分别提出了MS 的诊断标准[1,2].将两种标准应用于自然人群中MS的诊断报道已有[3,4],但这两种MS诊断标准在临床的适用性如何尚少报道.我们在WHO及ATPⅢ的诊断标准基础上,结合我国人群生理参数特点,分别调整了肥胖的标准,比较了几种MS诊断标准对本地区高血压、糖尿病或两者并存收治入院的患者的诊断情况,并对几种诊断标准的临床应用作了初步探讨。

急性下肢深静脉血栓形成(ADVT)病情进展快,发展至股青肿可危及患肢的存活;如出现肺栓塞,可危及生命.2002年始我们在运用重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)治疗ADVT时从给药途径、给药时间及用药量上均进行了系统规范,并取得了较以往更好的效果,现报道如下。

冠状动脉搭桥手术(CABG)在粥样硬化、钙化的升主动脉部位操作时,极易造成斑块栓子脱落,进入脑血流,导致中枢神经损伤或者脑卒中;进入冠状循环,导致围手术期的心肌梗死 [1].非体外循环下的冠脉搭桥手术(OPCABG)虽然避免了插管、冷灌等涉及升主动脉的操作,但必需阻断升主动脉,进行近心端吻合,故仍然不能避免危险.我院在OPCABG中对8例升主动脉粥样硬化的患者,采用了升主动脉不接触(no-touch)技术,完全避免上述问题,现总结如下。