2001年 · 第114卷第01期

研究转导人醛脱氢酶1类（ALDH-1）和多药耐药基因（MDR1）的人脐血CD34+细胞对4-氢过氧环磷酰胺（4-HC）和P-糖蛋白外排药物的耐药性是否增加。

构建双顺反子逆转录病毒载体G1 NA-ALDH1-IRES-MDR1，并用脂质体法转染包装细胞系GP+E86和PA317，使用含有VCR和4-HC试剂的培养基进行克隆选择和亲嗜性生产者克隆和双嗜性生产者克隆之间的乒乓上清感染，我们获得了高滴度的双嗜性PA317生产细胞，其高滴度可达5.6 × 10⁵CFU/ml。在造血生长因子的刺激下，用含有人ALDH-1和MDR1cDNA的逆转录病毒上清反复转染脐血CD34+细胞。

通过限制性内切酶分析验证双顺反子逆转录病毒载体的构建。聚合酶链反应（PCR）、逆转录（RT）-PCR、Southern blot、Northern blot、荧光激活细胞分选（FACS）方法和3-（4，5-二甲基噻唑-2-基）-2，5-二苯基溴化四唑（MTT）分析表明，双耐药基因已整合到脐血CD34+细胞的基因组DNA中并高效表达。转基因受体细胞对4-HC的抗性是未转导细胞的4倍，P-糖蛋白外排药物的抗性是未转导细胞的5.5-7.2倍。

双顺反子逆转录病毒载体介导两种不同类型耐药基因转入人脐血CD34+细胞并共表达，为提高肿瘤临床联合化疗耐受性提供了实验基础。中国医学杂志2001；774（7）：25-29

研究全反式维甲酸(ATRA)和三氧化二砷(AS₂O₃）对急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞体内和体外组织因子（TF）表达和促凝血活性（PCA）的影响。

来自用ATRA或AS治疗的APL患者的新鲜分离的APL原始细胞的PCA₂O₃使用一阶段凝血试验检测。采用ELISA法检测TF抗原，RT-PCR法检测TF mRNA。早幼粒细胞NB4细胞系的成熟敏感(NB4）或抗性亚克隆(NB4-R1），以及用或不用ATRA或as处理的pMSCV-PML-RARa感染的U937细胞₂O₃，也进行了检查。

ATRA和AS₂O₃可在体内和体外下调APL细胞的TF抗原及其mRNA转录和膜PCA，呈时间依赖性。PML-RARa+U937细胞的TF抗原水平明显高于逆转录病毒载体感染的U937细胞。ATRA和AS₂O₃也可以下调用或不使用PML-RARa转染的U937细胞中的TF抗原。

ATRA和AS可下调APL细胞组织因子表达和PCA₂O₃通过下调TF表达，如₂O₃也可用于改善APL中DIG相关出血。我们的数据表明PML-RARa+U937中升高的TF抗原可能与融合蛋白PML-RARa有关。ATRA和AS的下调作用₂O₃在U937细胞中TF的表达可能不涉及这种融合蛋白。中国医学杂志2000；114（1）：30-34

为了研究参与癌症转移的基因，使用mRNA差异显示来比较具有不同转移潜能的人肺巨细胞癌（PG）衍生的两个细胞亚系的基因表达水平。

使用体内致瘤性和裸鼠自发转移试验，分离并表征了具有不同转移潜能的人肺巨细胞癌（PG）的两个亚系（BE1，LH7）。mRNA差异显示用于比较它们之间的基因表达水平，获得的结果通过Northern杂交证实。

一条差异表达条带与Ras-GTP酶激活蛋白SH3结构域结合蛋白（G3BP）几乎相同（99%同源性）。G3BP在LH7中表现出强表达（在受体裸鼠中是非转移性的），在BE1中表现出非常弱的表达（100%转移频率）。在与来自人前列腺癌细胞系PC-3M的另一组具有不同转移潜能的细胞亚系（在我们实验室建立）的Northern杂交中检测到相同的不同表达水平的G3BP。

我们的结果表明，G3BP与癌症转移有关，因为它在具有不同转移潜力的两组细胞亚系中的差异表达。中国医学杂志2001；114（1）：35-38

从蛋白和基因水平探讨p53基因与脂肪组织肿瘤的关系。

采用免疫组化LSAB、PCR-SSCP和DNA测序对82例病例进行了检测。结果p53蛋白仅在脂肪肉瘤中表达，其中阳性染色率为48.08%（25/52）。在不同亚型脂肪肉瘤中，高分化脂肪肉瘤染色阳性率为30.00%（9/30），远低于低分化脂肪肉瘤（P<0.005).通过PCR-SSCP分析在2个样品（多形性脂肪肉瘤）中确定了单链DNA模式的异常。通过DNA测序检测p53基因外显子8密码子268的错义突变（AAC→ATC）。另一个杂合共义突变可能存在于p53基因外显子6密码子221处（GAG→GAA）。

提示p53蛋白与脂肪肉瘤的发生、分化及恶性程度有关。检测p53蛋白表达水平可能对评价脂肪肉瘤的分化程度和恶性程度有一定价值。p53基因外显子8、6出现点突变。中国医学杂志2001；114（1）：39-43

目的：探讨涎腺粘膜相关淋巴组织淋巴瘤（MALT-oma）的组织病理学特征及发病机制。

对32例涎腺MALT-oma的临床资料、石蜡包埋切片、免疫组化玻片（SP法）及手术标本的电镜特征进行了研究。

患者男27例，女5例，平均年龄54.76岁。病变位于腮腺区17例，余15例位于颌下腺。大部分MALT-oma被作为背景的大量中心细胞样细胞（CCL）和偶尔的大细胞（中心母细胞或免疫母细胞样）的浸润所取代。在MALT-omas中存在“淋巴上皮病变”。免疫组织化学发现，在所有MALT-omas中，CD20表达为阳性，CD45RO表达为阴性。

大多数MALT-omas是低度恶性肿瘤，具有“归巢”现象。这些病例通过手术和化疗进行管理。少数MALT-OMAs转变为高级别恶性肿瘤，预后较差。获得性MALT可能是对自身免疫性疾病和感染的反应。刺激下的高免疫反应和MALT增生可导致肌上皮性涎腺炎，并导致唾液腺MALT瘤。中国医学杂志2001；774（7）：44-47

了解Ki-67基因表达在恶性细胞周期中的调控机制。

进行非放射性原位杂交（ISH），结合免疫组织化学研究Ki-67基因在各种人细胞和组织中的转录和翻译。本研究使用HeLa细胞和新鲜结肠癌细胞、扁桃体、正常胰腺和胰腺癌组织。通过聚合酶链反应(PCR)扩增位于Ki-67抗原基因外显子13的435bp cDNA片段。制备地高辛标记的反义和正义RNA探针，结合MIB-1免疫组化检测Ki-67mRNA。

通过地高辛标记原位杂交技术成功地在人HeLa细胞、结肠癌细胞、扁桃体组织标本和胰腺癌组织切片中实现了Ki-67 mRNA的定位。对结肠癌细胞和胰腺癌组织载玻片的ISH显示，恶性细胞中存在比正常细胞强得多的Ki-67基因的细胞质和核周mRNA信号，这与MIB-1核蛋白信号一致。

建立了一种灵敏、实用的原位杂交方法，用于分析人细胞和组织中Ki-67抗原mRNA。Ki-67基因第13外显子转录异常可能是结肠癌和胰腺癌恶性增殖的原因。中国医学杂志2001；114（1）：48-53

评价螺旋CT多平面重建（MPR）、三维重建（3D）和仿真喉镜（CTVL）在喉及下咽癌中的临床应用。

对22例喉癌或下咽癌患者进行了螺旋CT轴位扫描，并进行了MPR、3D和CTVL检查。将这些结果与纤维喉镜检查和手术的结果进行比较。

结合轴位和MPR图像，术前肿瘤分期和转移淋巴结诊断的准确率均为95%。在23%的病例中，MPR比轴位图像显示了更多关于肿瘤范围的信息；三维图像从多个角度清晰地显示了肿瘤、血管和气道的延伸。颅尾CTVL发现肿瘤的位置、大小、范围与喉镜吻合良好，3例经尾颅入路CTVL显示肿瘤与声带及前连合的关系，纤维喉镜无法触及。

螺旋CT轴位图像清晰显示喉癌和下咽癌的部位、大小和范围，MPR和3D图像有助于显示肿瘤的三维图像和解剖关系。CTVL能清晰显示喉及下咽粘膜表面结构，是喉镜检查的良好补充方法。中国医学杂志2001；114（1）：54-58

评估冠状动脉内支架置入术在不稳定型心绞痛（UAP）急性期的疗效和安全性。

55例UAP患者随机分为早期（Ⅰ组，n=29）和延迟介入治疗（Ⅱ组，n=26）。I组48小时内行冠状动脉造影及支架置入术，Ⅱ组7~10天后行冠状动脉造影及支架置入术。记录手术成功率、入院至心绞痛缓解的时间间隔和住院时间。还观察到30天内的心脏事件。

两组的临床特征和血管造影特征相似。手术成功率无显著差异（93%对96%），但30天内心脏事件发生率I组明显低于Ⅱ组（0%对9.2%，P<0.05).Ⅰ组从入院到心绞痛缓解的时间间隔（4.4±3.1天对5.7±2.9天）和住院时间（8.8±3.2天对13.5±3.1天）均显著缩短P<0.05).

冠状动脉内支架植入术在UAP急性期是有效和安全的。早期经皮冠状动脉介入治疗可快速改善症状并缩短住院时间。其长期效果必须在未来的随机研究中得到证实。中国医学杂志2001；114（1）：59-61

探讨血管内照射对兔球囊血管成形术后再狭窄的影响。

建立兔髂动脉粥样硬化模型后，在髂动脉病变段行球囊血管成形术。家兔随机分为3组：对照组、10Gy照射组和18Gy照射组。对受照组在扩张部位进行血管内照射¹⁹²lr放射性导丝穿过导管。四周后，处死动物并切下靶节段。进行组织病理学和形态计量学分析。

18 Gy组的平均最终管腔面积大于对照组或10 Gy组（P<0.05).18 Gy组的内膜面积较小（P<0.05).

¹⁹²lr血管内照射可预防球囊血管成形术后再狭窄。效果与递送的剂量有关。其机制与抑制新生内膜增殖有关。中国医学杂志2001；114（1）：62-63

检测醛固酮合成酶基因-CYP11B2 mRNA在正常和纤维化大鼠肝脏中的表达，评价抗甾酮的疗效。

将160只体重约250 g的Wistar大鼠分为4组。模型组(n=40)注射40%CCI₄（0.25 ml/100g）皮下注射，每周三次。在抗甾酮组(n=40)中，大鼠注射40%CCI₄（0.25 ml/100g）皮下注射，每周三次。相当于20 mg•kg的抗甾酮^-1•d^-1灌胃（ig）给药。在malotilate组(n=40)中，大鼠注射40%CCI₄（0.25 ml/100g）皮下注射，每周三次。Malotilate相当于50 mg^•公斤^-1•d^-1被给予ig。在对照组（n=40）中，大鼠仅注射橄榄油。2、4、6、8、10周后处死动物，进行形态学检查。用图像分析系统检查胶原的面积。通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和原位杂交检测纤维化和正常肝中醛固酮合酶基因CYP11B2 mRNA的表达。

原位杂交和RT-PCR显示，肝星状细胞（HSC）内质中CYP11B2 mRNA的表达在纤维化发生时上调。组织学观察显示，抗甾酮组6周前纤维化程度和胶原面积均小于模型组（P<0.05).抗甾酮组和苹果酸酯组之间无显著差异（P>0.05).但此后，抗甾酮组的纤维化程度和胶原面积均高于苹果酸酯组（P<0.05).抗甾酮组与模型组无显著差异（P>0.05).

CYP11B2 mRNA的表达在纤维化肝脏中上调。抗甾酮在早期可具有部分纤维生成抑制作用。中国医学杂志2001；114（1）：64-68

研究中性粒细胞衍生的炎症介质Mr 37 kDa阳离子抗菌蛋白（CAP37）对内皮细胞功能的作用。

本研究中使用的内皮细胞获自人肺微血管和大鼠主动脉。后者是宝拉·格拉玛斯博士的善意礼物。本研究中使用的mono-mac 6细胞系是H.W.Loms Ziegler-Heitbrock博士慷慨赠送的。

通过测量组蛋白的钙和磷脂依赖性磷酸化来确定细胞蛋白激酶C活性。使用Costar测定内皮细胞迁移™Transwell仪器。使用流式细胞术测定粘附分子ICAM-1和PECAM-1的细胞表面表达。RT-PCR用于从用LPS处理的内皮细胞扩增CAP37。

我们证明了最初被鉴定为对单核细胞具有强效抗微生物活性和趋化活性的CAP37能够调节内皮细胞功能。CAP37以剂量和时间依赖性方式激活内皮细胞蛋白激酶C。重要的是，CAP37增加了内皮对单核细胞的粘附特性。CAP37以剂量和时间依赖性方式上调众所周知的粘附分子ICAM-1和PECAM-1。此外，CAP37促进内皮细胞迁移。进一步的研究表明，CAP37在内皮细胞中响应促炎细胞因子如肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1 α以及炎性介质如脂多糖而被诱导。未刺激的内皮细胞不组成型表达CAP37。测定内皮CAP37的cDNA序列，发现与中性粒细胞来源的CAP37获得的序列高度同源。

我们的研究强烈表明，CAP37在单核细胞-内皮相互作用和单核细胞从脉管系统迁移到血管外组织中起关键作用。中国医学杂志2000；114（1）：9-13

探讨声门上癌隐匿性淋巴转移的病理特点。

在显微镜下对100例声门上癌患者的153例颈清扫标本进行了评估。

在100例患者中，38例有隐匿性转移淋巴结。病理发现转移淋巴结51个，大小0.5~2.6 cm（平均1.1 cm）。51个淋巴结中Ⅰ级1个(2%),Ⅱ级37个(73%),Ⅲ级12个(24%),Ⅱ级1个(73%)N(2%).51个结节中早期21个（41%），生长期18个（35%），tull期7个（14%），包膜外期5个（10%）。声门上癌的分化程度和外观与隐匿性转移无直接关系。

声门上癌隐匿性转移率高，选择性颈清扫术可能是必要的。中国医学杂志2001；114（1）：88-89

调查尿液中重要肠球菌分离株的患病率，并确定哪些因素与患病率增加相关，特别是抗生素敏感性。

对8年期间肠球菌尿分离株的医院实验室记录进行了回顾性分析。通过菌落形态、在6.5%氯化钠中的生长以及它们在40%胆汁盐存在下水解七叶皂苷的能力来鉴定物种。还按照国家临床实验室标准委员会的规定，通过纸片扩散技术对9种常用抗生素进行了药敏试验。

在39 881份尿液标本中，9116份（22.9%）培养阳性。在这9116株中，1001株（11.0%）是肠球菌，是第四种最常见的尿分离株。大肠杆菌是最常见的（36.2%）。大多数肠球菌来自儿科患者（28.4%）和泌尿外科（24.5%）。所有肠球菌对氨苄西林和奥格门汀（阿莫西林—克拉维酸）完全敏感。对庆大霉素的敏感性从1990年的79%显著下降到1997年的58%（P<0.005).对头孢菌素和呋喃西林的敏感性相对稳定，但对萘啶酸的敏感性各不相同。研究期间未检测到万古霉素耐药性，未见菌血症并发菌尿病例。

肠球菌的分离在8年期间相对稳定，所有分离株对较老的β-内酰胺^氨苄西林、头孢克洛和奥格门汀完全敏感，但对其他常用的泌尿药物如萘啶酸和复方新诺明（甲氧苄啶-磺胺甲恶唑）表现出不同程度的多重耐药性。由于多重耐药肠球菌在许多国家的出现以及我们社会的高昂药物费用，当务之急是在医院监测肠球菌感染时保持警惕。中国医学杂志2001；114（1）：90-92

比较鼠树突状细胞（DC）和巨噬细胞（M）对外源性抗原的内吞途径。

用辣根过氧化物酶(HRP)-5nM胶体金脉冲鼠骨髓来源的DC和腹膜M′s 10分钟，然后分组并在培养基中追逐0-120分钟。在电镜下采用酸性磷酸酶的细胞酶化学和MHCⅡ免疫细胞化学方法研究了5 nm胶体金在细胞内的分布。

HRP-5 nm胶体金脉冲10分钟，追逐30分钟后，树突状细胞内化的HRP-5 nm金颗粒大部分进入MHCⅡ类区室（MⅡCs），小部分进入酸性磷酸酶阳性溶酶体。与DC相反，大多数M′s溶酶体被HRP-5 nm金颗粒进入，一小部分HRP-5 nm金颗粒进入MⅡC。追逐60分钟后，在M φ s内几乎看不到5 nm金颗粒，而大多数5 nm金颗粒仍保留在DC中。

外源性抗原在树突状细胞中的内吞途径似乎与Más不同。Más摄取的抗原主要在30分钟内进入溶酶体。在DCs的情况下，大多数内化抗原进入MⅡCs，这可能与其独特的抗原提呈功能有关。此外，M′s似乎比DC具有更强大的清除外源性抗原的能力。中国医学杂志2001；114（1）：93-96

使用体外循环（CPB）的心内直视手术与炎症级联反应相关，炎症级联反应会导致术后并发症（包括多器官衰竭）的发展。为了提供该主题的最新情况，我们简要回顾了最近的英语文献。

在CPB期间，已经认识到各种因素诱导复杂的炎症反应。基于对潜在机制的增强理解，已经开发了治疗策略来减少这种炎症反应及其随后的破坏性作用。与常规操作相比，非体外循环冠状动脉旁路移植术可能导致更少的炎性损伤，这反过来可以减少心脏、肾脏或神经功能障碍的发生率。同样清楚的是，改善CPB材料的生物相容性可以导致更好的患者恢复。由于所涉及的病理生理学似乎是多因素的，因此单一干预不太可能达到预期目标。药理学策略（如类固醇预处理）和机械装置的改进（如使用肝素涂层CPB回路）都可能具有重要的临床意义。促炎反应和抗炎反应之间的平衡对于限制炎性损伤的程度可能是至关重要的。

迄今为止，器官保护的概念不应再局限于单个器官。相反，调查必须扩展到关注系统层面。中国医学杂志2001；114（1）：3-8