2010年 · 第33卷第05期

POCT在临床实践中已经得到广泛应用.应该认真回顾总结,冷静思考有关检测速度与费用、检测质量等方面的问题,并尽快制定临床应用POCT的指南或规范性文件.这有助于POCT检测结果的准确可靠,有助于POCT在临床实践中的准确应用。

血糖的POCT(point-of-care testing)因具有快捷、灵敏、不受场所限制,明显缩短检验报告时间等优点,成为被临床广泛用于连续监测患者血糖的一种手段,该技术既方便患者又有利于临床,因此近年来在各大中型医院内得到迅速发展.但血糖床旁检验常常脱离检验科控制和管理,且由临床科室非检验人员进行操作,因此如何避免床旁检验报告的结果与检验科报告结果的差异造成的矛盾、如何保证血糖床旁检验的每批产品的检测质量都做到有效控制,解决临床应用中的问题,保证患者检测结果的准确性和可靠性是临床医生和检验工作者越来越关心的焦点.医院应该把床旁检验纳入整体管理体系之中,提高床旁检验的准确性,有效实现床旁检验的全面质量控制.床旁检验是医学检验中一个新的分支,检验科有责任对散在临床科室的床旁检验进行指导和管理,应该对医院内床旁检验的管理起积极的引领作用.在此通过本文介绍华山医院检验医学科如何从JCI认证角度并结合CAP-LAP的标准,规范全院血糖床旁检验质量管理的一些做法。

目的 探索上海地区血清Cr临床检测结果的一致性,进行表面健康人群的分布调查,并通过改良的适用于中国人群的MDRD公式计算eGFR,了解其分布情况,进一步评估eGFR的临床适用性.方法 每次实验前将自动化分析系统校准品(c.f.a.s.)中含有的根据IFCC推荐方法测得的Cr值传递到1份新鲜人混合血清,以此校准各参加医院检验科的Cr检测系统.14家医院检验科先后进行6次试验,并在检测结果基本一致后进行6 837名(男3 289名,女2 132名,儿童及青少年1 416名)、年龄段为0～99岁的表面健康人群Cr值测定及调查,并依据文献发表的适用于上海人群的GFR估算公式[eGFR=175×(血清Cr)-1.154×(年龄)-0.203×0.742(女性)×0.827]估算表面健康人群的eGFR值.结果 校准前各参加医院检验科之间的Cr检测值CV为3.1%～9.1%,校准后各医院之间检测值具有良好的一致性,CV降至5%以下.Cr人群分布调查后,得到结果为:成年男性63.0～102.8 μmol/L、成年女性:45.0～76.0 μmol/L;儿童及青少年:0～1岁11.0～77.0 μmol/L,＞1～＜3岁15.5～33.3 μmol/L,3～5岁19.0～42.0 μmol/L,6～19岁41.4～62.0μmol/L.成年男女间Cr存在差异,男性为(82.1±10.9)μmol/L、女性为(59.4±8.4)μmol/L,差异有统计学意义(t=94.3,P＜0.01);eGFR值可减小性别间的差异[男性为(79.1±13.5)ml·(min·1.73 m2)-1;女性为(79.2±13.6)ml·(min·1.73 m2)-1,差异无统计学意义,t=0.266,P＞0.05].成年人按年龄每10岁分组,统计显示Cr及eGFR年龄组间均存在差异(x2值分别为2601、1105,P均＜0.01).结论 采用新鲜人混合血清,可以使不同医院(不同检测系统)之间的Cr检测值差异明显减小;Cr人群分布应按性别、年龄加以区分;使用eGFR可减小性别差异,但无法消除年龄间差异。

目的 建立一种HPLC测定血清胆固醇酯n-3脂肪酸指数的方法.方法 血清标本来自于70名北京医院健康志愿者和36例冠心病患者,用NaOH乙醇溶液水解血清三酰甘油,乙酸终止水解反应,正己烷提取胆固醇和胆固醇酯,HPLC分离脂质,UV(205 nm)检测.20:5-CE和22:6-CE用液相色谱串联质谱鉴定,各胆固醇酯峰面积修正因子用测定相应组分胆固醇含量的方法确定,归一化法定量,计算n-3脂肪酸胆固醇酯的百分比(即胆固醇酯n-3指数).结果 色谱分析在6 min内完成;影响胆固醇酯n-3指数测定的三酰甘油用4 mol/L NaOH乙醇溶液水解30 s可被去除;测定血清胆固醇酯n-3指数的批内和总CV为0.66%和0.90%,106名试验对象血清胆固醇酯n-3指数略呈正偏态分布(偏度值=1.25,峰度值=1.70),全体中位数为0.98%(0.37%～2.40%).n-3指数对数基本呈正态分布,(x)±s为0.003 7%±0.15%.性别组n-3指数分布与全体类似,女性和男性中位数(范围)分别为1.08%(0.60%～2.40%)和0.95%(0.37%～2.11%),不同性别间差异具有统计学意义(t=-3.021,P=0.003).结论 成功建立了HPLC测定血清胆固醇酯n-3指数的方法,有望在营养监测和心血管病危险分析中发挥作用。

目的 采用柱前衍生高效液相色谱法-紫外检测法建立一种测定人血清甜菜碱浓度的方法.方法 以对溴苯乙酰溴和18-冠醚-6溶于乙腈制成衍生液,将其与甜菜碱反应形成的衍生物用Supelcosil LC-SCX色谱柱进行分离.流动相为乙腈∶水体积比90∶10,含16 mmol/L的氯化胆碱,等度洗脱,流速为0.8 ml/min,检测波长为259 nm,利用甜菜碱标准品绘制标准曲线,外标法定量检测20名健康大学生志愿者血清甜菜碱.结果 甜菜碱的测定线性范围为6.25～200.00 μmol/L,回归方程Y=1 568.1X-2 747.5,R2=0.999 8.最低检测限为3.0 μmol/L.批内不精密度为1.88%～3.79%(平均3.24%),批间不精密度为3.14%～6.76%(平均4.39%).方法 回收率为95.89%～102.86%(平均99.16%).结论 成功建立一种检测人血清甜菜碱浓度的方法,适用于实验室及临床常规检测。

目的 建立以TCR β基因重排为分子标志,基于ASO引物的RQ-PCR方法,检测成人T-ALL患者的TCR β基因重排,以利于动态监测患者的MRD.方法 20例成人T-ALL患者的初诊DNA标本经多重PCR检测方法设计38条引物,分成3管,分别扩增TCR β基因完全重排和不完全重排,克隆产物经电泳和双色基因扫描鉴定.对其中4例患者进行基因测序和序列比对分析,根据克隆特异性序列信息,利用软件设计4条ASO引物,作为RQ-PCR检测的上游引物,合成通用的Jβ下游引物和TaqMan探针,对患者的随访标本定量监测MRD.结果 20例患者中有17例可检测到克隆性TCR β基因重排,克隆检出率为85.0%(17/20).其中16例可检测到至少1个Vβ-Jβ完全重排(94.1%,16/17),7例患者有Dβ-Jβ的不完全重排(41.2%,7/17),完全Vβ-Jβ和不完全Dβ-Jβ重排之间的比例约为2∶1.双色基因扫描分析显示Jβ2家族的使用频率为73%,Jβ1家族的使用频率为27%,Jβ2家族的使用频率明显高于Jβ1家族.4例患者使用ASO引物RQ-PCR扩增TCR β重排靶基因的标准曲线的斜率为-3.60～-3.27,相关系数＞0.99,敏感性达4×10-5μg/μl,荧光背景信号不显示或较低.监测4例T-ALL患者在疾病治疗各随访时间点的TCR β重排靶基因水平,包括诱导完全缓解、巩固治疗等时间点,RQ-PCR显示其MRD水平随病情的缓解呈逐渐下降的趋势.结论 以克隆性TCR β基因重排为靶分子的特异性寡核苷酸引物RQ-PCR方法可对T淋巴细胞系统的恶性克隆进行准确定量,适用于成人T-ALL患者MRD的随访监测。

目的 探讨白血病细胞粒细胞系、单核细胞系两系分化的蛋白质组学研究,分析差异表达蛋白质在白血病筛查中的应用价值.方法 利用ATRA和甾体类新药(编号:NSC67657)诱导髓系白血病HL60细胞,构建白血病细胞粒细胞系和单核细胞系分化模型.采用双向电泳技术,分离HL60细胞向粒细胞系、单细胞系分化前后差异表达蛋白质分子,经MALDI-TOF MS鉴定.对EF1A1、TLE1、NME3这3个差异表达蛋白质分子进行RT-PCR和WB验证.收集临床5例白血病患者和1名健康人的骨髓标本,研究3个差异表达蛋白质分子在白血病患者骨髓细胞中的表达情况.结果 WB分析发现细胞分化前后NME3蛋白质表达下降(对照组A=0.227,NSC67657处理组A=0.079,ATRA处理组A=0.064,2种药物处理组与对照组比较差异有统计学意义,P均＜0.01).在4份白血病患者标本中NME3表达水平高于健康人骨髓标本(健康人A=0.082,2例慢性粒细胞白血病急变期患者A=0.274、0.269,急性单核细胞白血病患者A=0.297,1例慢性粒细胞性白血病患者A=0.258,与健康人比较差异有统计学意义,P均＜0.05).另1例慢性粒细胞白血病患者A=0.121,与健康人比较差异无统计学意义,P＞0.05.结论 蛋白质组学技术从基础研究到临床应用是个阶段性的过程,本研究通过对筛选所得分化相关蛋白质NME3在白血病患者骨髓中的表达分析,为后续蛋白质组学技术在白血病早期诊断中的应用奠定了基础。

目的 观察丁胺卡那霉素对血小板聚集和凝血功能试验的抑制作用,探讨其对止血功能的影响及相关作用机制.方法 将不同浓度丁胺卡那霉素分别与献血者富血小板血浆和乏血小板血浆作用,分为4组:0 mg/L组、30 mg/L组、91 mg/L组和910 mg/L组.以血小板聚集分析仪检测ADP诱导的血小板最大聚集率,以流式细胞仪检测活化血小板P-选择素、GPⅡb/Ⅲa及Fg-R表达水平,以血液凝固分析仪测定PT、APTT、TT及Fg水平.以前述4种浓度丁胺卡那霉素以及62.5 U/ml肝素钠和109 mmoL/L柠檬酸钠分别与新鲜全血作用,测定CT及血浆Ca2+浓度.分别检测10例急性下呼吸道感染患者在丁胺卡那霉素常规剂量治疗前和治疗后30 min ADP诱导的血小板最大聚集率、P-选择素、GPⅡb/Ⅲa及Fg-R表达水平,并测定PT、APTT、CT和血浆Ca2+浓度.结果 30 mg/L组血小板最大聚集率、P-选择素和Fg-R分别为(65.8±3.9)%、(9.2±1.0)%和(12.6±1.7)%,显著低于0 mg/L组的(88.0±4.6)%、(16.1±1.3)%和(31.0±2.5)%,差异均有统计学意义(t值分别为9.442、8.432和9.993,P均＜0.01);30 mg/L组APTT(80.5±6.8)s和CT(857±66)s明显高于0 mg/L组的(33.0±3.6)s和(447±35)s,差异均有统计学意义(t值分别为11.312和13.211,P均＜0.01);丁胺卡那霉素浓度与血小板最大聚集率呈显著负相关,与聚集的抑制率呈显著正相关,与APTT呈显著正相关[r值分别为-0.832、0.939和(＞0.870),P均＜0.05];30 mg/L组,91 me/L组和910 mg/L组呈剂量依赖性抑制P-选择素和Fg-R表达及使CT增加[F组间=21.44、26.24和(＞29.81),P均＜0.01].0 mg/L组、30mg/L组、91 mg/L组和910 mg/L组PT值分别为(14.7±1.9)s、(15.2±1.7)s、(15.6±1.5)s、(22.1±2.1)s,差异有统计学意义(F=8.21,P＜0.05),而GPⅡb/Ⅲa、TT、Fg以及血浆Ca2+浓度在4组间差异无统计学意义(P均＞0.05).丁胺卡那霉素治疗后患者血小板最大聚集率(51.6±10.1)%、P-选择素(6.8±1.8)%和Fg-R(20.1±5.8)%明显低于治疗前的(66.8±11.4)%、(10.9±3.1)%和(28.5 ±7.4)%,APTT(49.8±5.9)s和CT值(660±59)s则明显高于治疗前的(26.9±3.8)s和(410±45)s,差异均有统计学意义(t值分别为5.456、8.875、7.423、10.012和11.322,P均＜0.01).治疗前、后GPⅡb/Ⅲa、PT和Ca2+浓度变化无统计学意义(P＞0.05).结论 丁胺卡那霉素通过抑制血小板纤维蛋白原受体活化和释放反应途径抑制血小板聚集,可能通过抑制内源凝血系统因子途径而抑制凝血功能,从而对止血功能有抑制作用;应用丁胺卡那霉素抗感染治疗可能有发生出血的危险。

目的 应用DiversiLab系统对鲍曼不动杆菌进行基因分型,并评价其可行性.方法 对2005年全国15个城市医院临床分离的58株鲍曼不动杆菌,应用以rep-PCR为原理的DiversiLab系统分型技术进行分型,并与脉冲场凝胶电泳分型和多位点序列分型技术结果进行比较;计算Simpson相关系数(Simpson's index of diversity)比较3种方法的分辨力.结果 DiversiLab系统将58株鲍曼不动杆菌分为5簇流行克隆和25个散发克隆;多位点序列分型技术将其分为35个序列型,并归为一个克隆复合体CC22(Clone Complex 22)和35个单一体(singleton);PFGE将其分成5个流行脉冲型和34个散发克隆.DiversiLab系统、MLST和PFGE的Simpson相关系数分别为0.876、0.944和0.961.结论 DiversiLab系统的操作简单、快速,可重复性好,可以作为大量菌株首选分型方法,但分辨力低于PFGE和MLST两种分型技术。

目的 调查上海华山医院2007-2009年间VRE的分离率,并对耐药菌株的分子特性进行研究,为本地区VRE的预防和控制提供有价值的信息.方法 通过琼脂平板稀释法(ADSP)从临床鉴定的890株肠球菌中筛选VRE菌株,并通过微量肉汤稀释实验测其对万古霉素及替考拉宁的MIC;采用PCR及测序方法检测万古霉素耐药基因以及可能毒力基因esp,hyl;运用MLST对VRE进行克隆分型并通过PFGE分型技术进行验证.结果 ADSP法及微量肉汤稀释实验共筛选出13株VRE菌株.其中6株VRE(2007-2008年)只对万古霉素耐药,但对于替考拉宁敏感(万古霉素MIC64～256μg/ml);耐药基因PCR产物测序结果提示这6株VRE均携带同一种可能导致万古霉素耐药的新型基因,该基因序列与已报道的耐药基因均不同;MLST及PFGE分型提示其属于不同型别.另外7株VRE(2009年1-7月)对万古霉素和替考拉宁的MIC结果分别为32～64μg/ml和16～32 μg/ml,耐药基因检测均为vanA.MLST分型结果提示13株VRE共分为4个不同的ST型,其中11株均属克隆复合型CC-17.13株VRE毒力基因esp和hyl的阳性率分别为69.2%和30.8%.结论 上海华山医院VRE克隆分型以CC17为主,同时发现上海华山医院存在一种可能导致万古霉素耐药的新型基因介导的VRE,该新基因的功能和定位尚待进一步研究。

目的 研究HPV 16型L2全长蛋白在HPV6、11、16和18型别间的交叉反应特性.方法 收集108例尖锐湿疣患者、156例宫颈癌患者和100名健康对照者的血清标本,采用PCR法从宫颈癌患者组织DNA中扩增HPV16 L2全长基因,将其克隆至原核表达载体PGEX-4T-1中,构建重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2,将鉴定正确的重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和WB鉴定;进一步通过WB检测HPV16 L2全长融合蛋白与HPV6、11、16和18型DNA检测阳性的患者血清的特异性结合能力.以镍螯合亲和层析柱(Nj-NTA Agarose)纯化HPV16 L2融合蛋白作为包被抗原,采用间接ELISA法检测3组标本中的HPV血清特异性IgG抗体.结果 成功构建了重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2,含有HPV16 L2的融合蛋白在原核表达体系中呈较高效表达,表达量为27.2%;SDS-PAGE和WB检测结果显示在约相对分子质量82 000处可见特异性阳性信号条带;以HPV6、11、16和18 DNA阳性患者血清为一抗的WB结果显示,HPV16 L2全长融合蛋白在相对分子质量82 000处均出现特异性阳性信号条带.ELISA结果显示,尖锐湿疣组、宫颈癌组和健康对照组血清抗体A值分别为0.825±0.409、0.808±0.376、0.128±0.15,阳性率分别为92.6%、92.3%和6.0%.3组间血清抗体A值及阳性率差异均具有统计学意义(H=207.292,x2=251.846,P均＜0.01),而尖锐湿疣组与宫颈癌组之间的血清抗体均值(0.825和0.808)差异无统计学意义(H=0,P＞0.05).结论 HPV16 L2全长原核融合蛋白具有较强的抗原性,与HPV6、11、16和18型别间具有交叉反应,可进一步用于HPV感染及其相关肿瘤ELISA血清学检测试剂的通用型靶抗原研究。

乙型肝炎患者肠道微生态紊乱在其病程发展中的作用已逐渐为人们所认识.因菌群失调引起的腹泻、内毒素血症和细菌易位为患者最为常见的并发症状[1-2]。

自的 用血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa抑制剂阿昔单抗在体外抑制全血中血小板来观察血小板图(PlateletMapping(R))技术的方法学可靠性,并对血小板图和凝血激活检测试剂盒(Rapid TEGTM,快速血栓弹力图)两种方法进行评估.方法 根据临床性能评价的要求,将不同浓度的阿昔单抗与健康志愿者全血混合后进行血小板图测试,并用Rapid TEG试剂盒测定肝素抗凝血的活化凝血时间(TEG(R) ACT)等参数,计算两种方法的线性、重复性和有效性.结果 随着阿昔单抗浓度的升高,除纤维蛋白原以外各激活方式凝集曲线的MA都有明显的线性减低;在(1～4)×10-2 mg阿昔单抗作用下,不同通道和系统的血小板抑制率重复性良好(CV＜10%);加入阿昔单抗后,AA激活途径的血小板抑制率由28.0%±2.8%升至63.4%±0.0%(t=21.9,P＜0.01);ADP激活途径血小板抑制率由35.9%±0.56%升至91.4%±1.1%(t=58.9,P＜0.01).TEG(R) ACT与肝素呈现明显的剂量线性关系;快速血栓弹力图检测参数除R以外,K、α、MA和TEG(R)ACT的测量重复性良好(CV＜5%).结论 血小板图能够灵敏地反映出血小板所受抑制程度的不同,具有良好的测量精密度和剂量效应关系.Rapid TEG在以TEG(R) ACT监测肝素浓度的同时,还提供了对总体凝血功能的分析。

现如今对如何提高检测PLT的准确性不断在关注及讨论[1-8].各种血液分析仪对PLT的检测多采用电阻抗原理,干扰因素较多。

疟疾是严重威胁人类生命和健康的世界性公共卫生问题.WHO将发展准确、快速诊断疟疾的技术视为防治疟疾优先考虑的对策之一[1]。

钩状效应是影响定性和定最免疫学检测准确性的一种现象,常导致检测结果呈假低值和假阴性的错误[1-2].高浓度HCG由于钩状效应易使定量检测结果偏低.我们发现3例滋养层细胞疾病患者的HCG浓度超过200 000 U/L,用化学发光免疫分析时结果严重偏低,现报告如下。

血液链球菌(Streptococcus sanguinis)为革兰阳性球菌,是人口腔的正常菌群,常见于牙菌斑中.该菌为机会性致病菌,可通过洗牙或牙科手术等引起的损伤而进入血液,定植于心脏瓣膜,是引起亚急性细菌性心内膜炎的常见病因之一[1].本研究报道1例由血液链菌引起的先天性室间隔缺损心脏病患者合并感染性心内膜炎。

患者男,21岁.因"咳嗽、咳痰、发热伴皮肤脓肿破溃10个月余"入院.患者于2008年11月底无诱因出现咳嗽、咳痰,咳少量白色黏痰,感咽喉不适,口服咽炎片无缓解.2008年底12月在当地医院查X线胸片后诊断为"大叶性肺炎",使用头孢菌类抗生素治疗5 d,症状无改善,并出现发热,伴畏寒,最高体温39 ℃。

病历摘要 　　患者女,18岁,河北省邢台市威县人,自幼面色发黄、苍白,进行性加重,重度贫血貌,间断输血维持治疗.继之头颅渐见增大,生长发育矮小,智力基本正常.曾于上海某医院诊断为地中海贫血(资料不详)。

GP73是Kladney等[1]从巨细胞肝炎的肝脏cDNA文库中筛选出的一种高尔基体Ⅱ型跨膜糖蛋白,其基因位于9号染色体长臂,全长3 042 bp,内含1个1 200 bp的开放阅读框,编码400个氨基酸,因在WB显示的相对分子质量73 000而得名,又称GOLPH2或GOLM1。

miRNA是一类21～23个核苷酸左右的非编码单链小RNA,首先由Lee等[1]于1993年在秀丽线虫中发现.Reinhart 等[2]于2000年发现miRNA具有控制线虫发育的重要功能.随后,miRNA成为医学研究的热点之一。

近年来,病毒性肝炎的实验室诊断领域取得了飞速的进展,新方法、新技术的出现提高了对病毒检测的灵敏度和准确度,使病毒性肝炎的诊断和治疗水平上了一个新的台阶.病毒性肝炎NAT分为两大类,即病毒核酸载量的检测和病毒基因型/基因突变检测.鉴于甲型、丁型和戊型肝炎病毒的检测主要以血清学检测为主,本文主要介绍乙型肝炎与丙型肝炎NAT的主要技术及进展。

为进一步活跃学术氛围，更好地实现检验与临床的沟通，加强和提高我国形态学临床检验技术水平，本刊从2008年起设置了“临床病例（理）讨论”栏目，重点介绍检验与临床工作中遇到的疑难及典型病例，以便普及形态学检验诊断的知识和技术。文章分病历摘要、病例讨论、诊断及鉴别诊断、病理诊断及病例来源5个部分。

近年来许多报道国内优秀科研成果的论文首先投向国外，特别是被美国科学引文索引（SCI）收录的高水平国际期刊上，以有助于促进国际间的学术交流，让世界更好地了解中国。为了将这些高质量、有影响的论文介绍给国内的广大读者，《中华检验医学杂志》将开设“在国外发表的SCI论文介绍”栏目，目的是使国内更多的读者共享我国的科研成果和相关学科的进展。

为顺应当今期刊网络化、数字化的发展趋势，更好地为广大作者、读者提供高质量的服务，本刊从2009年5月15日起将开通中华检验医学杂志网站及稿件远程管理系统。网站的开通，将为广大读者、作者、编者提供一个学术交流和沟通的平台。通过本刊网站，读者、作者、编者将能及时了解本领域的国内外学术动态及各专业学术会议的召开事宜。目前本刊有VIP会员1200余人，

分子诊断技术以其显著优势和巨大潜力，已成为临床诊断各种技术产品中需求增长最快的技术。随着越来越多的基因组信息和蛋白质组信息的产生，分子诊断必将为预测医学、预防医学和个体化医疗（即3P医学）保驾护航。为扩大交流，搭建起研究与应用间畅通的桥梁，探讨逐步建立完善的分子诊断技术质量控制体系和标准，由中国工程院医药卫生学部、中国医院协会临床检验管理专业委员会、

由中华检验医学杂志编辑委员会、中华医学会检验分会联合主办的“第三届全国病毒性肝炎与艾滋病实验室诊断与临床专题学术会议”定于2010年6月11-14日在成都召开。本次论坛的目的是为从事病毒性肝炎和艾滋病检验的工作人员、临床医生、中国疾病预防控制中心（CDC）专家、生产厂家搭建学术交流的平台，共同探讨中国病毒性肝炎和艾滋病防治、科研的现状及展望，

由中国生物化学与分子生物学会脂质与脂蛋白专业委员会主办，湖北省医学会、湖北省生化学会协办的“第十届全国脂质与脂蛋白学术会议”拟于2010年8—9月在湖北省宜昌市召开。本次会议主题为“脂质学创新与发展，服务于和谐社会”。为促进了我国脂质与脂蛋白研究及学术水平，我们很荣幸的邀请多位在脂质、脂蛋白分子生物学、病理生理学和临床医学方面做出突出贡献的国内外著名专家教授，