2009年 · 第32卷第02期

随着蛋白质分离和鉴定技术的不断发展,蛋白质组学已日益广泛地应用到生物医学的各个领域.由于其可高通量、大规模地研究正常和病理情况下细胞或组织中蛋白质表达及翻译后修饰的变化,探索疾病发生的病因、病理过程、病损机制,筛选用于疾病诊断、治疗及预后的生物标志物,逐渐成为检验医学中的研究热点。

过去的几年中,基于质谱技术的蛋白质组学分析方法已经成为寻找新的疾病标志物的重要手段之一.由于它具有高灵敏度、高通量、快速以及能和生物信息学技术结合同时快速分析大量的蛋白质或多肽的优点,使之成为临床研究的有力工具.然而,最近的一些研究显示,因为这项技术的重复性和数据统计分析等方面的不足而受到了争议.本文介绍了采用该方法进行标志物筛查时在实验设计、质谱技术以及数据分析等方面面临的一些挑战,探讨其在血清或血浆分析中的应用。

血型鉴定与相容性试验直接关系到输血疗效.为避免严重的输血反应,有较多新的免疫血液学技术与方法正逐步应用于输血实验室,如凝胶试验、单核细胞单层分析试验以及血型基因分析等.在这些技术中,有些可提高检测的灵敏度和自动化水平,有些则可更为准确地预示输血后红细胞在体内存活状态.运用这些技术,可使输血的相容性明显提高.虽然在解决疑难血型问题时,并没有通用的方法,但医务工作者可通过选择不同免疫血液学技术进行组合,也可及时为患者提供合适的血液。

随着人类基因组全序列测定的完成,人类基因的注释与功能确认已成为生命科学面临的最重要任务之一.蛋白质是生命活动的功能执行体,人类基因组中绝大部分基因及功能有待于蛋白质水平上的揭示与阐述.蛋白质组学(proteomics)研究全部基因所表达的所有蛋白质在不同时间与空间的表达谱和功能谱,可以全景式地揭示生命活动的本质.蛋白质组还是研究疾病发病机制和防治药物的直接靶体库.因此,蛋白质组研究已成为21世纪生命科学的重点之一。

目的 研究embB基因306位点(embB 306)突变在耐多药结核分枝杆菌中的分布,探讨以该位点作为耐多药分子检测标记的应用前景.方法 从上海疾病预防控制中心获得其保存的已知耐药表型的结核分枝杆菌291株,使用错配PCR及DNA测序两种方法检测其embB 306位点的突变,分析耐药表型与结核分枝杆菌embB 306位点的突变的相关性.结果 74株耐多药菌株中有38株(51.4%)该位点有突变(X2=93.8,P<0.01),而其他24株多耐药菌株中有9株(37.5%)为embB 306突变株(X2=60.1,P<0.01);41株耐单药菌株中仅有2株(4.9%)存在该位点的突变(X2=6.8,P=0.0093),而152株全敏感菌株中无一存在该位点突变.以embB 306位点作为耐多药结核分枝杆菌(MDR-TB)分子检测标记的特异度达94.9%(206/217).结论 以embB 306作为耐药突变位点,特别是耐多药结核分枝杆菌的分子检测标记,具有一定的灵敏度和较高的特异度,而且检测方法简单易行,可用于耐多药结核分枝杆菌的临床快速检测。

目的 对来自重庆地区的1个原发性开角型青光眼(POAG)家系进行MYOC基因突变筛查,研究POAG与MYOC基因突变的相关性,探讨MYOC基因突变在中国人POAG发病中的作用.方法 1个4代共39例的青光眼家系,8例为已确诊患者,健康对照者100名.用单链构象多态性分析(SSCP)、PCR.限制性片段长度多态性(RFLP)和基因测序的方法筛选MYOC基因的突变(包括G34C、C136T、G144T、G227A、C624G、G736A、C1009G、A1036G、C1081T、G1099A、G1138A、A1139C、T1430A、C1441A和C1442T等),同时对检测到的突变结果进行生物信息学分析.结果 在该家系中,发现1个G227A(Arg76Lys)突变,该突变存在2例已确诊的POAG患者和1例家系表型正常者中,健康对照者中未榆出.发现1个缺失突变(C1009del),该突变存在于家系中所有发病患者和1例4岁的子代亲属,健康对照者中未检出.未发现其他突变.由于C1009del突变是首次发现,据此我们申请了GenBank号,已发表的GenBank序列号为FJ237047,对应的蛋白序列号为ACI62293.结论 G227A(Arg76Lys)突变为已报道的多态性位点,与该家系青光眼的发病无相关性.移码突变C1009del突变与青光眼的发病密切相关,也可由此推测青光眼患者亲属的发病率较正常人高。

目的 建立血小板谱抗原,鉴定引起血小板输注无效和新生儿血小板减少性紫癜的血小板特异性抗体,为血小板血型研究和临床治疗提供依据。方法根据中国人群人类血小板同种抗原(HPA)-1-HPA-16等位基因频率分布资料,利用聚合酶链反应-序列特异引物(PCR-SSP)技术对O型血小板供者进行HPA-1-HPA-6、HPA-15分型,筛选合适的供者,组成血小板谱抗原。通过建立的血小板谱抗原,利用简易致敏红细胞血小板血清学技术(SEPSA)鉴定同种免疫反应产生的血小板抗体的特异性。结果从O型血小板供者中筛选出11名供者,建立了血小板特异性抗体鉴定谱抗原。其可鉴定HPA-1-HPA-6,HPA-15抗体的特异性。在所筛检1 120份样本中,有3例患者检出HPA抗体,其中HPA-4b(Penb)抗体1例,HPA-15a(Govb)抗体2例。结论通过血小板谱抗原鉴定血小板抗体的特异性,对提高临床输注血小板的安全性和有效性,以及预防新生儿血小板减少性紫癜有积极的意义。

目的 探讨精浆中瘦素(lep)浓度与生殖内分泌激素睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和胰岛素样生长因子1(IGF-1)浓度之间的相关性,以及对精子密度、运动能力及有关生殖功能指标的影响.方法 随机选择126例不育症患者和30名具有正常生育能力的健康男性对照者,分别应用放射免疫分析(RIA)技术检测其精浆中的lep、T、FSH和LH浓度,应用免疫放射分析(IRMA)技术检测其精浆中的IGF-1浓度.根据精子数量的多少将不育症组分为A组(精子数≥20×109/L,即精子数量正常组)、B组(精子数<20×109/L,即少精子症组)和C组(无精子症组);根据精液分析中10个高倍视野(HPF)出现WBC的多少,分为WBC精液组(精液中WBC≥1×109/L)和非WBC精液组(精液中WBC<1×109/L);根据精子活力和活动率情况,将不育症A组分为精子活力正常组(a+b≥50%)和不良组(a+b<50%)(a:快速前向运动精子数,b:慢速或呆滞前向运动精子数),精子活动率正常组(活动率≥60%)和下降组(活动率<60%);根据健康对照组检测结果,将不育症A和B组分为精子穿透力正常组(穿透力>140 mm)和下降组(穿透力<40mm),精子顶体完整率正常组(完整率≥80%)和下降组(完整率<80%),精子尾部肿胀率正常组(肿胀率≥60%)和下降组(肿胀率<60%).结果 不育症组精浆中lep浓度为(2.77±0.80)μg/L,明显高于健康对照组的(1.14±0.31)μg/L,差异有统计学意义(t=10.943,p<0.05);IGF-1和T浓度分别为(17.67±8.09)μg/L和(4.84±2.15)nmol/L,明显低于健康对照组的(24.79±9.32)μg/L和(6.30±2.53)nmol/L,差异有统计学意义(t=4.205、3.228,P均<0.01);FSH和LH浓度分别为(32.61±9.14)U/L和(40.57±12.40)U/L,与健康对照组的(29.63±7.56)U/L和(37.25±9.19)U/L比较,差异无统计学意义(t=1.655、1.378,P均>0.05).不育症组精浆中lep浓度与IGF-1和T浓度之间存在明显的负相关(r=-0.237、-0.316,P均<0.01),与FSH和LH浓度之间均无相关性(r=0.104、0.112,P均>0.05);A、B、C3组的lep浓度有逐渐增高趋势(F=115.93,p<0.01).不育症组中的精子活力与活动率正常组、非WBC精液组,以及精子穿透力、尾部肿胀率和顶体完整率正常组的lep含量均低于不正常(或下降)组.结论 精浆中lep浓度与IGF-1、T之间存在一定的相关性,其可能通过抑制雄激素分泌和影响精子获能等导致精子密度下降和抑制精子的活力及活动率。

目的 研究人呼吸道合胞病毒(RSV)F基因第546～881碱基编码的融合蛋白(即F蛋白)主要抗原性区域第168～289氨基酸片段的抗原性初步探讨其作为诊断抗原的应用价值.方法 用逆转录(RT)-PCR的方法扩增出RSV Long株F基因546～881 bp片段(F'),将其插入到转移载体质粒pBacPAK9中,获得相应的重组质粒pBacRSV F',与线性杆状病毒BacPAK6 DNA(Bsu36 Ⅰ酶切)共转染Sf9昆虫细胞获得重组病毒BacPAK F',并在昆虫细胞中表达.重组蛋白用Ni2+螫合柱亲和层析纯化,用免疫印迹(Western blot,WB)法检测重组蛋白的抗原活性.并用该方法检测33例急性下呼吸道感染患儿血清特异性抗体,同时用间接免疫荧光法检测患儿的鼻咽分泌物中RSV抗原.对两种方法检测标本的阴性率进行比较.结果 重组病毒BacPAK F'在昆虫细胞中表达相对分子质量约13 000的重组蛋白.纯化后的重组蛋白能与特异性抗RSV抗体结合.WB检测33例急性下呼吸道患儿血清特异性抗体,结果显示阳性11例,阳性率为33.3%,免疫荧光法检测结果阳性9例,阳性率为27.3%,2种检测方法阳性率差异无统计学意义(x2=0.29,P>0.05).结论 纯化后的在昆虫细胞中表达的RSV F基因546～881 bp片段编码的融合蛋白片段具有较强的抗原活性,对RSV感染的快速诊断具有一定的临床应用价值。

目的 探讨实时荧光逆转录(RT)-PCR方法检测急性戊型肝炎患者血清戊型肝炎病毒(HEV)RNA的意义.方法 采用实时荧光RT-PCR方法,对HEV ORF3基因保守区进行扩增和检测.收集北京佑安医院住院和门诊434例急性戊型肝炎患者血清;甲型肝炎患者40例、乙型肝炎患者100例、健康献血员110名作为对照组;提取HEV RNA进行荧光RT-PCR检测.结果 434例急性戊型肝炎患者血清中232例(53.5%)为HEV RNA阳性.对照组血清HEV RNA检测均为阴性.与血清抗-HEV IgM检测比较,434例急性戊型肝炎患者HEV RNA检测的总符合率为67.1%,两种检测方法差异有统计学意义(Kappa=0.308,P=0.000).5例患者的首份血清检测为HEV RNA阳性,但抗-HEV IgM为阴性,系列追踪检测,相继出现抗-HEV IgM阳性.急性戊型肝炎患者的血清HEVRNA的检出多在发病的2～10 d内.结论 荧光RT-PCR方法有较高的特异性,应用实时荧光RT-PCR方法能对Ⅰ和Ⅳ戊型肝炎病毒感染的患者血清中的RNA进行定性检测.在临床使用可以提高对HEV早期诊断的水平。

目的 探讨中性粒细胞VCS参数在诊断急性细菌感染中的应用价值.方法 利用贝克曼-库尔特五分群(类)血细胞分析仪(LH750)分析112例血培养细菌阳性的急性细菌感染患者和70名成年健康对照者、45例非细菌感染WBC增高组的外周血中性粒细胞平均体积(MNV)、平均高频传导(MNC)、平均激光散射(MNS)参数,以及中性粒细胞的体积分布宽度(NDW),并与传统的WBC计数、WBC分类、细胞形态学、C反应蛋白(CRP)等感染指标进行比较分析.将血液细菌感染组根据WBC总数高低分成A、B、C 3组,A组:WBC<11.0×109/L;B组:11.0 ×109/L≤WBC<15.0×109/L;C组:WBC≥15.0×109/L;根据中性粒细胞(NE)值分为2组:NE<0.85组和NE≥0.85组.结果 急性细菌感染组的MNV、NDW分别为154.17±10.08、24.36±4.14,高于健康对照组的142.09±4.13、19.04±1.97和非细菌感染WBC增高组的150.63±8.14、20.19±4.73,差异有统计学意义(F值分别为20.738、28.190,P均<0.01).而急性细菌感染组的lVlNS为137.15±7.61,低于健康对照组的144.51±4.36和非细菌感染WBC增高组的142.45±7.11,差异有统计学意义(F=5.217,P<0.01).A组的MNV、NDW、MNS分别为148.09±5.76、22.39±1.97、140.07±6.11,B组为152.83±5.75、24.14±1.35、141.44±5.35,C组为164.28±6.49、29.42±5.93、134.27±9.61,与健康对照组间比较,差异有统计学意义(F值分别为24.720、31.642、7.931,P均<0.01);NE%<85%组的MNV、NDW、MNS分别为149.17±9.06、22.59±2.73、141.19±4.34,NE%≥85%组为159.03±10.23、27.64±4.51、135.62±8.95,与健康对照组比较,差异有统计学意义(F值分别为23.970、51.309、19.792,P均<0.01).急性细菌感染组的MNV在临界值(cut-off值)为150时,敏感度为70%,特异度为90%.NDW与中性粒细胞核左移现象相关(r=0.33,P<0.01);当NDW的cut-off值为23时,敏感度为72%,特异度为100%.MNV与NDW的敏感度高于传统的WBC计数(WBC的cut-off值≥11.0×109/L时,敏感度为57%)、NE(NE的cut-off值≥0.85时,敏感度为44%)、中性粒细胞核左移(杆状核以上阶段>5%时,敏感度为66%)、CRP(cut-off值≥10 mg/L时,敏感度为65%)等感染指标.结论 中性粒细胞的MNV、NDW参数在急性细菌感染时能特异而灵敏地反映粒细胞的形态学变化,是诊断细菌感染的一个客观而又快速经济的指标。

目的 应用Sysmex XE-2100全自动血细胞分析仪XE-pro IPF master软件定量检测外周血中的网织血小板比率(immature platelet fraction,IPF),对其进行方法学评价,以探讨IPF在监测肿瘤患者化疗时骨髓增生情况中的临床应用价值.方法 随机选取临床新鲜全血标本高、中、低值,连续重复测定20次,计算变异系数(CV)评价批内精密度和重复性;用仪器配套质控品连续测定20 d,评价批问精密度和重复性;同时评估其稳定性和携带污染率,并进行该方法与流式细胞术检测IPF的相关性研究.选择182名健康对照者以及130例肿瘤化疗患者,根据治疗后PLT的变化情况将肿瘤化疗患者分为化疗后PLT下降组和PLT恢复组,检测各组IPF值.结果 该血细胞分析仪检测IPF的批内精密度高、中、低值的CV分别是4.71%、4.33%、4.95%,批间CV为4.1%,均小于5%.稳定性检测中值和低值24 h内CV均小于5%,高值24 h内CV小于10%.携带污染率取值范围为0.6%～2.7%,平均值为1.2%.与流式细胞仪检测IPF相关性较好(R2=0.776 1,P<0.01).化疗后PLT下降组的IPF中位数为14.45%,PLT恢复组为7.35%,健康对照组为15.68%,3组间差异有统计学意义(H=49.032,P<0.01).PLT下降组的IPF值高于PLT恢复组(t=-5.681,P<0.01),PLT恢复组的IPF值低于健康对照组(t=-6.662,P<0.01).结论 应用Sysmex XE-2100血细胞分析仪进行IPF检测精密度高,稳定性好;IPF可作为肿瘤化疗患者PLT生成情况的有效评估指标。

变应性哮喘是一种以气道高反应性和慢性炎症为特征的气道炎症性疾病.其病因既受环境影响,又有明显的遗传倾向.有学者采用定位克隆法,在世界不同种族中发现人5q31-33是哮喘的重要基因候选区[1]。

SHV型超广谱β内酰胺酶(ESBLs)自1983年首次报道至今,已经有近百种衍生酶,它们可引起产酶菌株对广谱头孢菌素及单环β内酰胺类抗生素耐药,并且具有快速转导耐药基团的能力,给临床的抗感染治疗带来了极大困难.SHV型ESBLs鼻分布广泛,美国、法国、瑞士、希腊、日本等许多国家均有大量报道.近几年来我国浙江[1]、北京[2]、上海[3]、广东[4]等地有关此酶的报道也明显增多,但在湖南地区尚未见SHV型ESBLs检测的报道。

目的 建立一种简便快速检测细胞内整体DNA甲基化水平的方法,以用于临床甲基化诊断.方法 采用高效毛细管电泳技术,以pH 9.6的48 mmol/L碳酸氢钠溶液[含60 mmoL/L十二烷基硫酸钠(SDS)]为分离缓冲液,检测波长为256 nm,在20 kV电压下,0.7 psi压力进样时间5 s,对2'-脱氧胞苷(dC)、5-甲基-2'-脱氧胞苷(mdC)、2'-脱氧腺苷(dA)、2'-脱氧胸苷(dT)、2'-脱氧鸟苷(dG)5种物质进行分离.在此基础上检测氨甲蝶呤(MTX)诱导的肺癌A549耐药细胞株内整体DNA甲基化水平.结果 通过不断优化分离缓冲液中SDS浓度(40、60、80 mmol/L)、pH值(9.4、9.6、9.8)、分离电压(15、17、19、20、22 kV)、进样时间(5、10、15、20、30 s)和毛细管温度(15、20、25、30℃),建立高效毛细管电泳检测细胞内整体DNA甲基化水平的方法,可在10 min内实现dC、mdC、dA、dT、dG的完全分离,其日内变异系数(CV)<0.2%,日间CV<2%,最低检出限为2μmoL/L.检测肺癌A549亲本细胞甲基化水平为(4.80±0.52)%;而不同浓度(15、30、40 μmol/L)MTX诱导耐药A549细胞株的甲基化水平分别为(4.20±0.44)%、(3.70±0.36)%、(3.10±0.35)%.结论 建立高效毛细管电泳检测整体DNA甲基化水平的方法具有高效、快速、简单、灵敏的特点;MTX耐药细胞株内整体DNA甲基化水平随着耐药浓度的增加明显降低。

目的 研究人骨髓间质干细胞(MSCs)诱导肿瘤的机制.方法 取18只SCID裸鼠随机分为对照组和实验组,对照组注射MSCs,实验组注射F6细胞,于第4(F6-4)、6(F6-6)、7(F6-7)周取肿瘤组织(每组3只).4例肺癌患者的肺癌标本(Lc)和癌旁标本为分别取自不同部位的手术病理标本.并用荧光差异显示技术(FDD)寻找差异基因;用PCR扩增、蛋白质印迹(WB)加以验证;实时荧光定量逆转录(FQ-RT)-PCR技术检测诱导致瘤细胞在裸鼠体内致瘤后致瘤组织基因表达水平.用粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)诱导MSCs致肿瘤细胞(F6细胞).结果 FDD结果显示,细胞周期蛋白(cyclin)Ⅰ基因高表达,与PCR、WB结果一致.FQ-RT-PCR表明,cyclin Ⅰ基因在MSCs、F6及3组F6致瘤组织细胞之间的表达水平差异有统计学意义(F=12.29,P<0.01),F6组cyclin Ⅰ基因表达水平为4.49±0.40,MSCs基因表达水平为0.04±0.02,增高112倍(P<0.01).裸鼠皮下注射致瘤细胞后,第4,6,7周分离肿瘤组织内cyclin Ⅰ基因表达分别为1.82±0.80、3.30±0.43和3.68±1.67,且呈上升趋势(与MSCs对比,P分别为<0.05或<0.01).4例肺癌患者肺癌组织基因表达分别为0.15±0.02、0.58±0.23、4.82±1.12、1.21±0.60,癌旁组织基因表达分别为0.04±0.02、0.09±0.04、0.94±0.74、0.15±0.08,肺癌组织内cyclin Ⅰ基因表达明显高于癌旁组织(F=12.39,P<0.01).WB证明F6细胞cyclin Ⅰ蛋白表达为0.32±0.08,MSCs蛋白表达为0.09±0.06,增高3.6倍(t=3.86,P<0.05).结论 cyclin Ⅰ基因在MSCs诱导突变到肿瘤细胞形成过程中高表达,且在MSCs诱导肿瘤发生过程中可能发挥重要作用。

逆转录病毒载体广泛用于基因靶向治疗,干细胞基因工程,以及感染其他方法难以转染的细胞系,如某些肿瘤细胞,神经细胞,原代培养细胞等.重组小鼠干细胞病毒(recombinant murine stem cell virus,rMSCV)是一种常用的逆转录病毒载体,除可携带目的基因或DNA片段外,该载体还有药物抗性基因和绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)基因。

目的 建立适用于自动生化分析仪的血清精氨酸代琥珀酸裂解酶(ASL)活性速率测定法,并进行方法学评价和初步临床研究.方法 根据ASL催化的化学反应,以及自动生化分析仪工作特点,建立特异性的偶联酶促反应体系,并对建立的方法进行方法学评价.共测定309例肝病患者、269例非肝病患者和40名健康人血清ASL和传统的肝病酶学指标ALT、AST活性.结果 建立了一种新的可在全自动生化分析仪上测定血清ASL活性的动力学方法.方法 学评价研究表明,本法的批内变异系数均值为4.0%,天间变异系数均值为5.9%,平均回收率是100.5%,在0～167.7 U/L间有良好的线性范围,最低检测限为0 U/L.干扰试验提示:胆红素<342 μmoL/L、常用抗凝剂在抗凝浓度内不会产生干扰,Hb>0.06 g/L时产生明显干扰.初步临床分析显示非肝病患者血清ASL水平与对照组间差异无统计学意义(q=0.027,P=0.979),而与ATL和AST间差异均有统计学意义(ALT:q=6.461,P=0.000;AST:q=6.481,P=0.000).结论 成功建立了适用于自动生化分析仪完成的ASL活性速率测定法,其有可能是一个较好的肝病实验诊断指标。

目的 通过荧光偏振免疫测定(fluorescence polarization immunoassay,FPIA)和酶放大免疫测定技术(enzyme-multiplied immunoassay technique,EMIT)测定环孢素A(cyciosporine,CsA),了解基质效应对检测结果的影响,解释在CsA室问质评结果中两方法的检测结果的差别,并找到纠正方法.方法 选择不同浓度的临床全血标本100份,用FPIA和EMIT技术进行检测,对比检测结果;通过添加Cu2+,zn2+评估离子残留对免疫反应的影响;用添加等体积血红蛋白富集液后再次抽提的方法,评价非全血基质对质控品和CsA标准品抽提率的影响.结果 检测临床全血标本FPIA(X)和EMIT(Y)检测结果具有良好的相关性(Y=0.926 8X-8.115,R2=0.996 9);金属离子残留对FPIA法和EMIT法均不产生下扰(P>0.05);非全血基质样本会降低两方法的抽提率;样本中血红蛋白含量≥30 g/L就可纠正非全血基质对抽提率的影响.结论 下发质控品的非全血基质是导致CsA室间质评结果中两系统的检测结果不一致的主要原因,可通过添加血红蛋白富集液进行纠正;遇器官移植受者有极低血红蛋白(<30 g/L)时,要允分考虑低血红蛋白对CsA检测结果的影响。

浙江大学医学院附属第二医院骨髓细胞室对每份细胞形态学检查和诊断报告执行2级制度[1],即先由血液学检验医师作认真的初级检查(1级检查),每天下午汇总后由高年资医师复检(2级检查),随后科室成员包括进修医生、研究生和实习同学共同参与,进行读片讨论和诊断评价,对需要进一步检查的项甘(如细胞化学染色、免疫组织化学等)提出建议,并于次日上午完成,下午审核,4点前发出诊断报告。

患者女,40岁,临床诊断为胃癌,既往有输血史.2007年12月计划行胃切除手术,为其进行交叉配血时主侧发生较强凝集,即送成都市血液中心血型窒进行血型血清学检查。

阿萨希丝孢酵母(Trichosporon asahii)系丝孢酵母属中的一种,为酵母样真菌[1].以往文献显示由该菌引起的感染主要累及皮肤,2001年杨蓉娅等[2-3]刮分别报道了国内首例由T-aaahii所致的全身系统性播散性感染和该菌的分离鉴定过程.我们于2006年8月至2007年2月间陆续从3例不同疾病患者的尿液中分离到该菌,现报道如下。

随着高效广谱抗生素的广泛应用,抗肿瘤治疗的深入开展,器官移植和外科其他介入性治疗的不断实施,皮质类固醇激素的广泛应用,以及AIDS患者的不断增多,侵袭性真菌感染呈现上升趋势,且病情严重,念珠菌已经成为引起血行感染的第4位的病原菌,侵袭性曲霉病已经成为白血病和骨髓移植受者等重症免疫受损、机体发生死亡的主要原因[1-2]。

由国际自由基学会(Society for Free Radical Research International,SFRRI)授权,中国生物物理学会自由基生物学和医学专业委员会承办,中国生物化学与分子生物学会临床应用生物化学与分子生物学分会、解放军总医院和中华预防医学会自由基生物医学专业委员会协办,SFRRI、亚洲自由基学会(SFRR Asia)、美国加州氧自由基学会(OCC),国家自然科学基金委员会、中国科学院生物物理研究所资助的第14届国际自由基大会于2008年10月18至22日在北京成功召开。

北京协和医学院的仉红刚教授等对一种新的乳腺癌患者血清糖蛋白抗原15-3（CA15—3）检测方法——光学蛋白质芯片（opticalprotein—chip，OPC）检测技术进行了应用和评价研究，认为该方法为蛋白质标记物的检测和生物分子相互作用的研究和监测提供了一种新的生物传感器检测技术。研究人员采用OPC，从60例乳腺疾病患者血清中检测CA15-3，并同时与电化学发光免疫分析（Eclia）法检测结果进行了对比分析研究。

南京大学临床医学院金陵医院的李晓军等在小鼠WEHI-231B淋巴瘤细胞中发现，细胞表面膜免疫球蛋白（mlg）聚集可导致WEHI-231细胞Id3启动子活性的上调表达。

南京大学临床医学院金陵医院中心实验科的崔英霞等在男性不育患者中发现了1例男性不育的无精子症患者，讨论了该患者的罕见核型和表型关系。

中山大学附属第一医院的欧阳涓博士和姜傥教授等在糖皮质激素（GC）抵抗的肾病综合征患者体内发现了热休克蛋白90（HSP90）的异常表达及分布。

复旦大学附属华山医院检验医学科刘维薇等采用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱测量法（surface—enhanced laser desorption／ionization time—of-flight mass spectrometry，SELDI-TOF—MS）技术在膀胱移行细胞癌患者的尿液中找到一组蛋白，并结合树状分析模式，通过盲筛试验，获得较高的敏感度和特异度。SELDI-TOF—MS是近年出现的蛋白质研究新技术，其综合了蛋白芯片和质谱技术的优点，目前已在前列腺癌、肺癌、乳腺癌等许多肿瘤中发现肿瘤相关蛋白。

目的 采用血清蛋白质组学方法筛选能诱发机体产生自身抗体的鼻咽癌(NPC)相关抗原,以便为NPC诊断和治疗提供候选标志.方法 收集19份NPC组织,采用二维凝胶电泳(2-DE)技术分离组织总蛋白质,每份组织样本同时做3块2-DE胶,其中将1块2-DE胶作为制备胶进行考马斯亮蓝染色,另2块2-DE胶采用半干式电转法将胶中的蛋白转至PVDF膜上,并分别与NPC患者自身的血清和健康人血清进行2-DE免疫印迹分析,识别能与多数NPC患者血清反应而不与或很少与健康人血清反应的蛋白质点,再从制备2-DE胶中切取相应蛋白质点,进行基质辅助激光解吸电离飞行时问质谱(MOLDI-TOF MS)和电喷雾电离四级杆飞行时间质谱(ESI-Q-TOF MS/MS)分析,获取肽质量指纹图和肽序列标签,数据库搜索鉴定蛋白质.结果 鉴定了13个能诱发机体产生自身抗体的NPC相关抗原:热休克蛋白70(HSP70)、人血清白蛋白(HAS)、热休克蛋白60(HSP60)、细胞角蛋白15(CK 15)、亮氨酸氨基肽酶(LAP 3)、α-烯醇化酶(α-enolase)、ErbB3结合蛋白(EBP1)、细胞角蛋白19(CK 19)、核糖体蛋白P0(RPP 0)、丙酮酸脱氢酶E1(PDE 1)、GTP结合调节蛋白(GNBP)、抗增殖蛋白(prohibitin)和Rho GDP解离抑制因子2(Rho-GDI 2),13种蛋白质点在21%的鼻咽癌患者中可见,而健康人中缺乏或出现频率较低.结论 本研究筛选到13个NPC相关抗原,这些抗原能诱导患者产生自身抗体,这些抗体有可能成为NPC诊断标志和治疗靶标。

目的 探索利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF Ms)技术,进行血清样品中蛋白质组学研究的稳定性和重复性.方法 采用德国布鲁克公司Microflex型号质谱仪,应用线性模式,采集范围800～10 000 m/z,以样品前处理(MB-wcx)试剂盒预处理样品,CLNPROT(TM)系统的FlexAnalysis和ClinproTools软件进行数据分析.结果 本研究是在方法学已经建立的基础上,对样品稳定性进行研究.分别对随机选取的2例肿瘤患者和1名健康人群血清样本进行的平行实验结果分析表明,在本实验条件下,所测样品的质荷比(即m/z比值)漂移在实验误差允许范围内,其变异系数(CV值)分别为12.7%、13.1%和18.8%,能够明确区分疾病与健康样本;同时扩大样本量对30名健康人进行验证,其整体峰型和特征性峰保持一致,平均CV值为25.5%,说明其稳定性和重复性完伞满足临床医学实验窒分析要求.结论 在已优化的实验条件下,利用生物质谱技术可获得稳定的血清多肽谱,具有潜在辅助诊断疾病价值。

由广东省医学会检验分会、香港医务化验学会和澳门诊疗技术员协会主办，南方医院检验医学中心承办的2008粤港澳检验医学学术会议于2008年11月21日至23日在广州市召开。此次大会设主会场和分会场，紧紧围绕当前检验医学最新进展和热点问题进行专题大会报告，以粤港澳三地学者为主、周边省份或地区学者广泛参与的多种形式进行学术交流和讨论，打造了活跃的区域性学术交流平台，同时也增进了粤港澳三地的检验医学学术的共同发展。