2008年 · 第31卷第05期

血液淋巴系肿瘤的流式细胞免疫表型分析(FCI)属于一种高度复杂的试验,有其特有的医学适应证;对实验中抗体及其组合的选择、数据分析与报告有较高要求;从事血液淋巴系肿瘤的FCI人员需要经过专门的培训与教育。

目的 研究趋化因子SDF-1α转录子基因突变,分析突变发生频率,以及其对HIV感染的影响.方法 研究对象包括居住在中国香港地区的278名HIV阴性健康中国人,49例HIV阳性白种人和13名高危未感染中国人.分别提取外周血单个核细胞基因组DNA和总RNA.建立PCR及逆转录PCR法,对SDF-1α启动子(promoter)、开放读码区(ORF)和3'端非编码区(3'UTR)基因进行序列分析.用人工引入点突变的错配引物双重PCR法对一新发现突变进行筛查,分析其在研究对象中的分布及意义.结果 对包括13名高危中国人、49例白种人和38名随机选取的健康中国人在内的100份标本测序分析显示,在SDF-1α启动子及ORF区内未见任何突变;在SDF-1α3'UTR发现一"GA"插入式基因突变,命名为SDF-1-3'GA(+),在GenBank中的序列号为AY874118.该突变在3组研究对象中均有发生,在健康中国人中的频率为15.1%(84/556),但在13名有HIV接触而未感染的高危人群中发生频率为30.7%(8/26).结论 与本身重要生理功能相对应,SDF-1α基因十分保守;在其3'UTR新发现突变SDF-1-3'GA(+)是否影响HIV感染,值得进一步研究。

目的 对1例女性血友病A(HA)患者进行产前诊断,探讨其分子发病机制.方法 利用测定FⅧ活性(FⅧ:C)、出血时间(BT)、血管性血友病因子(VWF)等指标进行HA表型诊断;用长链PCR及序列特异PCR进行FⅧ基凶内含子22及1倒位检测,对FⅧ基因的所有外显子及其侧翼序列进行测序.联合FⅧ基因内外的8个多态性位点进行遗传连锁分析,DXS 52(ST14)位点多态性以PCR产物凝胶电泳法榆测,7个微卫星位点(F8Civs13、CA22、DXS15、DXS9901、G6PD、DXS1073、DXS1108)的多态性以多重荧光PCR法检测,产前诊断加用性别位点(Amelo).利用甲基化敏感的限制性内切酶HpaⅡ对基因组DNA进行酶切,荧光PCR法对HpaⅡ酶切前后的基因组DNA进行人类雄激素受体基丙(HUMARA)中CAG重复序列的扩增,荧光扫描法对扩增产物进行检测,根据酶切前后PCR产物的峰值变化来分析判断X染色体的随机灭活模式.结果 先证者的FⅧ:C为2.1%,其余表型检测结果均正常,其家系成员表型检测结果均正常.FⅧ基因内含子22倒位检测示先证者为22倒位阳性携带者,家系其他成员及胎儿均为22倒位阴性;先证者FⅧ基因内含子1倒位检测结果为阴性,其FⅧ基因测序未发现突变.遗传连锁分析发现先证者的X染色体分别遗传自其父亲、母亲;其胎儿为女性且遗传了先证者来源于其母亲的1条X染色体.先证者为X染色体非随机灭活,其来自母亲的x染色体被大部分灭活,而来自父亲的x染色体大部分被保留活性.结论 FⅧ基冈内含子22倒位及X染色体非随机灭活导致了该例女性血发病A的发生,其胎儿为正常女性。

目的 应用呼吸道感染常见病毒快速筛查技术检测人类偏肺病毒(human metapneumovirus,hMPV),并对检出的hMPV进行分子生物学鉴定.方法 采用Luminex 100多功能悬浮点阵检测技术和多重PCR技术同时筛查检测呼吸道合胞病毒、流感病毒、人类偏肺病毒等7种病毒、11个亚型.人类偏肺病毒的鉴定采用hMPV核蛋白基因特异性片段PCR扩增、核酸测序,并进行进化树分析.结果 47份临床标本共筛查出病毒19株,检出率40.2%(19/47),其中呼吸道合胞病毒8份、占检出病毒的42.1%(8/19),流感病毒7份(占36.8%),副流感病毒、鼻病毒、柯萨奇病毒、人类偏肺病毒各1份(占5.3%).检出的这例人类偏肺病毒为深圳地区首例,经hMPV核蛋白基因特异性片段核酸序列分析,其与hMPV日本株、北京株、泰国株的同源性＞98%.进化树分析表明深圳株的病毒核蛋白基因与北京株、日本株、泰国株等在同一基因进化簇中.结论 人类偏肺病毒可能是儿童呼吸道感染的主要病毒之一,应引起临床的重视.多功能悬浮点阵和多重PCR技术对病毒感染件疾病的快速筛查具有实用价值,尤其在解决流行病病原学分析方面具有重要意义。

目的 建立一种基于同位素稀释/气相色谱/质谱技术(isotope dilution/gas chromatography/mass spectrometry,ID/GC/MS)的血清尿素候选参考方法.方法 以[13C,15N2]尿素为内标,用无水乙醇沉淀、去除血清中的蛋白类物质,依次使用丙二醛-二甲基缩醛和N-甲基-(三甲基硅烷基)-三氟乙酰胺(MSTFA)将尿素衍生成为三甲基硅烷氧基嘧啶,用气相色谱/质谱(GC/MS)分析衍生产物,以包括法定量.结果 血清尿素测定的批内、批间和总变异系数的平均值分别为0.38%(范围0.12%～0.47%)、0.62%(范围0.49%～0.87%)和0.73%(范围0.51%～0.93%),回收率范围为99.37%～100.95%,分析美国国家标准和技术研究院(NIST)2个水平的血清标准物质SRM 909b,测定结果与靶值的偏差小于0.2%.结论 建立了ID/GC/MS技术测定血清尿素的方法,方法准确、精密、简便,可望作为血清尿素测定的参考方法。

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清血管生成素2(Ang-2)水平及其临床意义.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测98例NSCLC患者和30名健康对照者血清Ang-2水平,比较不同分期、有无转移及术后1年复发与否的患者之间是否存在差异.结果 NSCLC患者血清Ang-2水平[中位数3 230.5 ng/L,范围(1 231.6～4 612.5)ng/L]显著高于健康对照者[中位数831.7 ng/L,范围(592.4～1 701.1)ng/L,U=15,P＜0.01].Ⅲ期患者血清Ang-2水平[中位数2 311.7 ng/L,范围(1 512.9～3 530.7)ng/L]显著高于Ⅰ期患者[1 593.6 ng/L,范围(1 235.2～2 763.1)ng/L,H=27.66,P＜0.01]和Ⅱ期患者[中位数1 581.4 ng/L,范围(1 231.6～2 852.3)ng/L,H=27.66,P＜0.01],但显著低于Ⅳ期患者[中位数3 808.2 ng/L,范围(2 235.8～4 612.5)ng/L,H=65.76,P＜0.01].有转移患者和术后1年内复发患者血清Ang-2水平分别高于无转移患者和无复发患者.结论 NSCLC患者血清Ang-2水平有可能作为肿瘤转移和术后复发的预测指标。

目的 了解肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)对大环内酯类抗生素的耐药情况及耐药机制.方法 对370份咽拭子标本进行MP分离培养,应用套式PCR扩增MP种特异16S核蛋白体RNA(16SrRNA)基因对临床分离株进行分子鉴定;通过药物敏感实验测定MP分离株对大环内酯类药物的MIC并筛选出耐药株;设计套式PCR扩增红霉素作用靶位23S核蛋白体RNA(23SrRNA)基因,扩增产物进行全自动DNA测序,测得序列与NCBI已登录的MP标准株M129(登录号X68422)23SrRNA基因作比对.结果 370份临床标本中分离MP 50株,分离阳性率为13.5%.50株中敏感株4株,耐药株46株(占92%).耐药菌株的红霉素、阿奇霉素、交沙霉素MIC值均升高.4株敏感株和肺炎支原体国际标准株FH的23SrRNA基因序列与基因库的MP基因序列相同,46株耐药株的23SrRNA基因发生点突变,41株突变位点在23SrRNA V区中心环的2063位,其中40株发生了A→G的点突变,1株发生了A→C的点突变;另5株突变位点在2064位,A→G.结论 MP对大环内酯类抗生素耐药率高,耐药性的分子基础是23SrRNA基因的点突变,其中2063位点突变占主导地位.23SrRNA基因发生点突变的肺炎支原体对红霉素、阿奇霉素及交沙霉素的MIC值均升高。

随着<中华人民共和国献血法>的颁布,无偿献血制度开始实施,无偿献血为临床医疗提供了有效的保障.它是一项崇高的人道主义事业,既关系到人民健康水平的提高,又是社会文明进步程度的重要标志。

输血是治病救人的重要手段,血液是一种重要的医疗资源,但另一方而输血和其他临床治疗方法一样,存在着一定的输血风险,其中以病原体感染风险尤为重要[1]。

蠊缨滴虫[1]是一种动物寄生原虫,属原牛动物门、鞭毛虫纲、超鞭毛虫目(flypermastigida)、缨滴虫亚目(Lophomonadina)、缨滴虫科(Lophomonadae)、缨滴虫属(Lophomonas)、蠊缨滴虫(L.Blattarum),通常寄生于白蚁、蜚蠊(蟑螂)的肠道。

非小细胞肺癌(NSCLC)的辅助诊断和监测常用的肿瘤标志为癌胚抗原(CEA)和细胞角蛋白片段19(CYFRA21-1).近几年研究发现,肿瘤M2型丙酮酸激酶(M2-PK)在肿瘤患者外周血中的浓度明显升高,可用于肿瘤的早期诊断、预后判断及疗效监测[1-3].本研究通过检测M2-PK在肺癌和肺良性疾病患者血浆中的水平变化,同时与NSCLC传统CEA和CYFRA21-1比较,以评价其在诊断NSCLC中的价值.一、对象与方法

目的 通过对人巨细胞病毒(human eytomegalovims,HCMV)原发感染BALB/c模型小鼠感染状态的实验研究,探索检测HCMV pp65 IgG亲和指数(avidity index,AI)在原发感染诊断中的意义和作用.方法 取6～8周龄SPF(Specific Pathogen Free)级BALB/c雌性小鼠30只,分为5组,每组6只,分别用2×105、2×105、2×104、2×103和2×102PFU/ml的5个剂量的病毒悬液腹腔注射小鼠,1.0 ml/只;另取浓度为2×106PFU/ml剂量的病毒,经56℃30 min灭活后,1.0 ml/只腹腔注射雌性小鼠共6只,作为灭活对照组;同株同代的HF细胞悬液1.0 ml/只腹腔注射雌性小鼠共6只,作为HF细胞对照组.各组小鼠于屏障系统内饲养1个月后,检测小鼠的感染状态.病毒分离检测脑、肺组织中感染性病毒颗粒,观察HCMV特异性细胞病变效应,PCR试验检测细胞培养物UL83基因,间接免疫荧光试验检测细胞玻片pp65抗原;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测小鼠脑、肺组织中HCMV pp67的转录;同时,用本室自制的截短pp65抗原制备的ELISA试剂盒检测血清标本中HCMVpp65特异性IgM抗体和IgG-Al.结果 2×104PFU/ml和2×105PFU/ml剂量的病毒感染小鼠后,脑、肺组织中均可检测到感染性病毒颗粒,感染率均为100%;RT-PCR均可检测到小鼠脑、肺组织中pp67转录产物;血清学检测这两组小鼠HCMV pp65 IgM均为阳性,HCMV pp65 IgG-AI＜50%;检测结果判断该两组小鼠为HCMV原发感染.余低剂量病毒组、灭活病毒组和人胚成纤维细胞(HF)对照组检测结果均为阴性.结论 HCMV AD169株可感染BALB/c小鼠,初次感染病毒1个月后可表现原发感染状态;以HCMV pp65重组蛋白为抗原榆测特异性IgM抗体以及相应IsG-AI间接ELISA法,可作为对HCMV原发感染的初筛手段,是诊断HCMV原发感染有效的方法之一。

控制医院感染的重要步骤是清洁、消毒、无菌技术、隔离、合理使用抗生素、监测和通过监测进行效果评价[1].世界卫生组织对器械的清洗消毒推荐原则中指出,对污染器械进行初步清洁是消毒的必要步骤。

患者男,64岁,因全身关节疼痛2月余,头晕行走不稳1周,言语不清、吞咽困难2 d,于2007年10月9日入院。

1849年Virchow在血液的外渗液中发现了胆红素，他称为黄色素（hematoidin）。1864年Stadeler使用胆红素（bilirubin）这个词语，1874年Taehanoff说明了胆红素与Hb的关系。胆红素来自衰老的红细胞内的Hb，在肝脏被生物转换，通过胆汁和尿液排出体外。测定胆红素一直是临床了解肝脏排除功能的重要项目。

目的 建立环介导等温扩增(LAMP)快速检测肺炎链球菌的方法.方法 根据美国国家生物信息中心(GenBank)上提交的肺炎链球菌R6株的lytA基因序列(登录号AF2)08540)设计特异LAMP引物,以盐酸胍一苯甲醇法提取阳性血培养瓶中细菌DNA,然后以LAMP技术扩增lytA基因,反应条件为63℃45 min,采用肉眼观察浊度和琼脂糖电泳的方法来观察结果.结果 在196份阳性血培养瓶中,采用LAMP法检测到肺炎链球菌16株,与传统方法比较,其检测肺炎链球菌的灵敏度和特异度均达到100%,且检测时间缩短为1 h左右.模拟标本的检测结果显示该方法的最低检测限为102CFU/ml.结论 该方法灵敏度高,特异性强,操作方便快速,适合从临床标本中检测肺炎链球菌。

窗口期、免疫静默感染以及罕见的亚型与变异是导致常规血清学漏检的主要原因[1].其中窗口期造成的影响尤为常见,有研究表明,在美国90%的HBV、HlV以及75%的HCV输血感染是因为窗口期漏检所致[2]。

所有血细胞均来源于一个共同的祖先,即造血干细胞(HSC),它是由胚胎干细胞发育而来的,主要存在于骨髓、新生儿脐带血、动员的外周血和其他造血组织中.造血干细胞在自我更新的同时,也在不断地分化和成熟为某一特定类型的血细胞。

朱平 <中华检验医学杂志>第七届编辑委员会委员.教授,博士研究生导师.1950年10月出生。

目的 探讨富集纯化造血干细胞(HSC)和髓系定向分化祖细胞的新实验方案.方法 根据造血干细胞和定向分化祖细胞在发育过程中表达某些特异性分化抗原的特性,通过免疫磁珠分选技术结合四色和六色流式细胞术分析14只健康小鼠的骨髓造血干细胞、造血祖细胞及定向分化祖细胞系列的表达,并对其进行分选,以进一步通过集落细胞培养和传代试验对分选后细胞的活性进行检测.结果 经上述实验方案分析,14只健康小鼠骨髓造血祖细胞(HPC)的表达率约为HSC的10倍;但其牛成活性远不如造血干细胞,共同髓系祖细胞(CMP)的传代能力仅为HSC的1/2,且次级分化的粒系单核系祖细胞(GMP)和红系巨核系祖细胞(MEP)的生成活性更弱,其传代次数为零.结论 通过多色流式细胞术实验方案可以分析纯化HSC和髓系定向分化祖细胞的表达,并精确计数HSC和祖细胞。

目的 建立用膜表面标志CD4+ CD25high CD-/low127界定调节性T淋巴细胞的方法,并评价其临床应用意义.方法 五色流式细胞术以Foxp3-FITC/CD127-PE/CD4-PerCP/CD25-APC/CD3-PC7抗体组合鉴定调节性T淋巴细胞,分选CD4+CD25highCD-/low127细胞鉴定Foxp3 mRNA和蛋白水平的表达情况,比较CD-/low127与Foxp3+界定调节性T淋巴细胞的相关性.用该膜表面标志分析20名健康对照者外周血及35例胃癌患者不同部位CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg)细胞的分布特点及意义.结果 用CD4+CD25highCD-/low127界定调节性T淋巴细胞的Foxp3蛋白表达率为87.1%,Foxp3 mRNA高表达.用膜表面抗原CD4+CD25highCD-/low127界定调节性T淋巴细胞与CD4+CD25highFoxp3+具有相关性(r=0.985,P＜0.01).胃癌患者外周血CD25highCD-/low127调节性T淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞的比例为(8.67 ±3.52)%,高于健康对照组[(5.12±2.46)%,t=2.542,P＜0.05].胃癌患者腹腔积液、肿瘤浸润性淋巴细胞、癌旁淋巴结中CD4+CD25highCD-/low127调节性T淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞比例均高于外周血(分别为t=2.357,P＜0.05;t=6.174,P＜0.01;t=5.481,P＜0.01).胃癌Ⅰ期+Ⅱ期患者外周血CD25high CD-/low127Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的比例为(6.04±2.31)%,Ⅲ期+Ⅳ期患者为(10.16±2.29)%,其分期差异具有显著统计学意义(t=2.473,P＜0.05).结论 CD4+CD25highCD-/low127抗体组合可用于鉴定调节性T淋巴细胞.胃癌患者CD4+CD25highCD-/low127调节性T淋巴细胞的比例升高,且增高程度与肿瘤临床分期相关。

目的 用流式细胞术分析外周血白细胞在前向角散射光强度(FSC)/侧向角散射光强度(SSC)散点图谱中单核细胞右下侧出现的一团细胞,并分析它出现的影响因素.方法 采用流式细胞仪分析细胞表面CD分子以鉴定细胞;通过实验研究温度、溶血素浓度、时间对它的影响,并测定血脂生化指标,通过统计学方法观察它们之间的关系.结果 (1)在PSC/SSC散点图谱中单核细胞右下侧出现的一团细胞与正常单核细胞表型同为CD45+CD13+CD14+,CD3-CD19-;(2)应用溶血素前后对比,单核绌胞位置在FSC/SSC散点图左移;(3)单核细胞在37℃时抵抗溶血素能力比22℃时降低;溶血时间延长,单核细胞左移增加;(4)患者出现单核细胞分群比例[31.5%(40/126)]高于健康对照者[5.1%(5/98)](X2=22.74,P＜0.01);(5)单核细胞分群标本的血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B100比不分群的标本低(P＜0.05),而总胆红素、白蛋白、高密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白A、脂蛋白a(Lpa)比较差异无统计学意义.结论 单核细胞在FSC/SSC散点图谱中可分为两群,其出现与单核细胞膜对溶血素的抵抗能力有关;它受溶血时间和温度影响.因此在检测单核细胞相关标志和功能时,要注意分群现象和细胞膜异常可能带来的影响。

目的 建立流式细胞术诊断X连锁高IgM血症(X-linked hyper-lgM syndrome,XHIM)的方法.方法 取患者、患者母亲和健康对照者外周血,肝素抗凝,用RPMI-1640培养基稀释,以15μl的佛波醇酯(1 ng/μl)和6 μl的离子霉素(50 ng/μl)作刺激剂,从而将外周血标本分为刺激组和非刺激组,运用荧光标记的抗细胞表面抗原单抗检测CD3+CD8-T淋巴细胞表而CD40配体的表达情况,同时检测CD3+淋巴细胞表面的CD69分子作为激活对照,以确定细胞活化的程度.结果 刺激组细胞表面CD69的表达率均在96%以上;患者母亲及健康对照者CD3+CD8-T淋巴细胞表面CD40的表达率分别为60.04%和62.87%,而患者仅为0.8%.非刺激组CD69的表达率均小于3%;患者、患者母亲和健康对照者CD40L的表达率分别为0.88%、4.15%和5.51%.结论 流式细胞术可以快速诊断X连锁高IgM血症,有可能成为该类疾病的初筛方法。

目的 了解聚肌苷酸胞苷酸(polyI:C)在C57BL/6小鼠中建立的原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)动物模型外周血T淋巴细胞表型.方法 20只雌性8周龄C57BL/6小鼠随机分为模型组和对照组,polyI:C 5 ms/kg腹腔注射模型组小鼠,对照组小鼠注射等体积无菌PBS,每周注射2次,16周后处死,然后进行肝组织苏木精-伊红(H.E)染色,间接免疫荧光法测定血清抗线粒体抗体(AMA),生化分析仪测定血清碱性磷酸酶(ALP)水平;流式细胞仪分析2组小鼠的外周血CD4+CD8+T淋巴细胞及自然杀伤性T淋巴细胞(NKT)所占比例;ELISA法测定血清IL-4和γ干扰素(IFN-γ)含量.结果 polyI:C注射16周后建立了符合PBC实验室诊断指标的动物模型:汇管区炎性浸润、血清AMA阳性、血清ALP水平升高;模型组小鼠外周血CD4+T淋巴细胞比例为(25.45±1.12)%,对照组为(26.72±0.63)%,差异无统计学意义(t=0.314,P＞0.05),模型组小鼠外周血CD8+T淋巴细胞比例为(18.3±0.91)%,对照组为(17.8±0.58)%,差异无统计学意义(t=0.226,P＞0.05);而模型组小鼠外周血NKT淋巴细胞比例为(11.56±5.09)%,对照组为(1.26 ±0.53)%,模型组高于对照组(t=9.504,P＜0.01),同时模型组小鼠血清IL-4含量为(22.19±2.31)ps/ml,对照组为(8.72±0.87)ps/ml,差异有统计学意义(t=58.06,P＜0.01),模型组小鼠血清IFN-γ的含量为(3.34±0.76)ns/ml,对照组为(1.14±0.21)ng/ml,差异有统计学意义(t=23.31,P＜0.01).结论 polyI:C诱导的PBC动物模型外周血NKT淋巴细胞比例显著增加,同时细胞因子IL-4及IFN-γ含量显著升高;NKT淋巴细胞可能在PBC模型及PBC的发病中发挥重要作用。

淋巴细胞免疫亚群构成比是机体免疫功能评价的重要指标之一,了解白血病患者初诊时的此项指标对其免疫功能恢复的判断、预后的评估具有重要意义[1-2]。

人类白细胞抗原-B27(human leucocyte antigen,HIA-B27)是HLA-I类分子基因中B位点上的1个等位基因,是经典的HLA位点编码的Ⅰ类主要组织相容性复合物基因产物之一。

答：流式细胞术已成为细胞周期和倍体分析最常用的检测方法，但用于细胞周期和倍体分析的标本其采集、制备、仪器检测和分析等各个环节均与检测结果的准确性密切相关。值得注意的有以下几点：（1）当标本自溶、脱蜡不完全、细胞数过少（低于10^5个细胞）、肿瘤细胞含量很低（异倍体细胞数占总细胞数10％以下）时，结果必须放弃或重复检测；（2）细胞通透剂种类很多，但用于碘化丙啶（PI）染色进行细胞周期和倍体分析的细胞通透剂，通常为70％冷乙醇；（3）乙醇必须与细胞充分快速混匀，避免细胞聚集成团；（4）进行上机测定前，需采用适当的筛网过滤细胞；（5）细胞周期和倍体分析对仪器的精密度要求很高，仪器校准微球的变异系数（CV）必须小于2％；（6）流式细胞仪获取细胞的速度不宜太快，通常控制在100—200个细胞／s；（7）荧光信号通过线性形式收集，以便清楚地区分各个周期时相，G1峰道数不低于最大道数的1／5；（8）采用荧光信号脉冲形状（如脉冲面积、宽度）获取和分析数据，用脉冲面积和宽度设门，

答：调节性T淋巴细胞（Treg）是一群具有抑制其他免疫细胞功能的T淋巴细胞，它可以抵抗肿瘤免疫功能，降低肿瘤免疫治疗的效果，有学者形象地将Treg比喻为“肿瘤逃避免疫监视的隐形衣”。因此，Treg在监测肿瘤免疫治疗和判断肿瘤预后方面起到重要作用，也为肿瘤治疗提供了新的研究靶点。

答：用于流式细胞术的对照品通常分为2类，一类对照用于设定流式细胞仪的检测阈值，包括同型对照、空白对照和健康对照等；另一类对照用于监测抗体和试剂的质量及整个实验过程，类似于质控品，包括阳性对照、阴性对照和健康对照等。

答：骨的整个生命过程中都表现出新陈代谢的活性，骨形成、骨吸收、骨静止等代谢活动构成了骨重建的全过程。骨代谢标志物反映的就是骨代谢变化速率、破骨和成骨细胞功能、骨转换的频率和速率；主要分为骨形成标志物、参与骨形成的标志物、骨吸收标志物以及骨质疏松相关的标志物等4类。

目的 评价28种质控血清或校准物在8种总甘油常规检测系统下的基质效应,并评价常规系统校准的准确性.方法 以同位素稀释液相色谱串联质谱测定m清总甘油的方法为对比方法,用甘油氧化酶法的8种常规测定系统为待评价方法,测定20份人新鲜血清和28种制备物中的总甘油.将两法测定人新鲜血清的结果作直线回归,求得Y值双侧95%的预测区问,评价制备物的基质效应.通过分析新鲜血清样本的测定结果评价常规系统校准的准确性.结果 制备物在进口A、B、C系统和国产D系统巾表现正基质效应,进口D系统正、负基质效应均有以正效应为主,国产A、B系统正、负基质效应均以负效应为主,只有1个制备物对国产C系统有较弱的基质效应.同对比方法相比,国产A、D系统存在正校准偏差,进口A、B、C、D和国产B系统1竽在负偏差,国产C系统不存在校准偏差.结论 我国血清总甘油的部分常规检测系统存在校准偏差,部分质控物和校准物存在基质效应.为实现检验结果的准确性和实验室问的可比性,临床标准化工作势在必行。

目的 研制能够模拟真实临床样本且无生物传染危险性的沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT)PCR检测质摔物,并进行稳定性研究.方法 在充分查阅文献的基础上,明确国内外已有文献报道的CT:PCR检测的靶序列,选择最普遍应用的CT质粒序列,采用重叠(overlap)PCR、分子克隆等技术构建含有所选择的常用检测目的 CT质粒序列的重组真核表达载体,即pTARGETTM-CT 质粒.然后,将载体以脂质体转染的方式转染入宫颈上皮细胞(HTB-SiHa细胞)中,收集细胞,经含20%小牛血清的细胞培养液稀释,即成为能模拟CT检测临床样本的细胞质控物.最后观察得到的质控物对目前国内常用商品试剂盒的适用性及在4℃、37℃及室温条件下的稳定性.结果 成功构建了含CT质粒(178-610)、(1219-1993)、(2471-3260)、(5239-5864)、(6722-7499)等5个片段的重组真核表达载体,并转入HTB-SiHa细胞中,得到了可模拟临床样本的CT PCR检测的质控物.采用深圳匹基生物工程有限公司、中山大学达安基因股份有限公司商品CT PCR检测试剂盒对转染后样本进行检测,得到阳性结果;定量为3.21×108拷贝/ml;倍比稀释后较高浓度样本检测结果呈梯度下降、10倍稀释循环阈值相差约3.3;对不同浓度稀释后在4℃、37℃及室温条件下保存1个月的样本的检测结果进行随机区组的两因素方差分析后发现,在各温度下保存的样本经检测后的结果问差异无统计学意义,所构建的质控样本至少可以稳定保存1个月.结论 利用重叠PCR与双酶切的方法,建立了一种将多间隔片段连接并构建入同一载体的简便有效的方法.成功地得到了可模拟临床标本的CT PCR检测质控物。

血液细胞分析仪是临床检验的常用设备,为保证其正常运行和准确的测定,每日室内质控和定期的室间质量评价以及定期的校正是必须的程序,更严格的要求则需要在每20～50个样品问随机多次插入质控样品,用于监测仪器的稳定性.配套的质控品价格昂贵且预定数量有限,国内实验室多不可能做到多次插入质控品进行监测。

提高实验诊断能力,完善服务内涵是医学实验室的工作重点.2003年10月中国医师协会检验医师分会成立,2004年卫生部在专科医师准入制度的试点学科中将检验医师准入列入其中,2005年北京市卫生局正式将检验医师纳入住院医师规范化培训体系中,从此检验I矢师的发展得到同行专家的关注和重视[1-3]。

笔者原本从事临床检验工作,因工作需要临时改行生殖医学实验室专业,从此开始了解和掌握医学伦理与伦理管理知识,从中受益匪浅,感受颇多.笔者基于自己对医学伦理知识的认识以及对生殖医学伦理管理的体会,思考检验医学存在的伦理问题,探讨这些伦理问题的解决方法。

病历摘要 　　患者男,20岁.患者2岁时开始间断鼻出血,出血量时多时少,可自行止血,2003年到河北医科大学第二医院几腔科就诊。