2018年 · 第41卷第08期

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry，MALDI-TOF MS)技术是临床微生物诊断中一项革命性创新技术，由于其快速、特异、操作简便等优势，现已迅速被临床实验室接受和认可。然而，MALDI-TOF MS技术在临床应用中仍然存在诸多的挑战，如样品制备还未做到最优化；鉴定技术存在局限性；数据库质量的提高以及微生物种类的添加还在讨论中；抗菌药物敏感试验领域的应用还存在争议；非常见鉴定结果如何转化到临床治疗仍在探索中等。但是MALDI-TOF MS在临床微生物诊断应用中还有一些需改进之处。(中华检验医学杂志，2018, 41：559-562)

血流感染是具有较高发病率和致死率的感染性疾病。准确快速的鉴定血液中的病原菌对于血流感染的诊断以及及时使用适当的抗菌药物治疗具有重要指导意义。基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI－TOF MS)在病原微生物鉴定中的应用是微生物鉴定领域的重大突破。该技术因其简单、快速、经济和准确的特性而被广泛的应用于微生物的鉴定。近年来该技术与直接从阳性血培养液中提取病原体的方法相结合，在阳性血培养的直接鉴定领域具有较好的应用。阳性血培养MALDI－TOF MS直接鉴定的前处理方法对于鉴定结果的准确性至关重要，是近年来该领域的研究热点之一。(中华检验医学杂志，2018, 41：563－566)

目的 评价基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术快速区分携带rmpA2毒力基因的高毒力肺炎克雷伯菌的能力。 方法 对浙江大学医学院附属第二医院和河南省人民医院的57株肺炎克雷伯菌，PCR扩增rmpA2毒力基因和荚膜血清型基因，多位点序列分型方法(MLST)进行分型，拉丝试验进行高黏液表型测定。MALDI-TOF MS对肺炎克雷伯菌进行鉴定并对峰图进行二维分析和算法统计，包括采用支持向量机算法(SVM)，遗传算法(GA)，监督使神经网络算法(SNN)和快速分类算法(QC)进行数据分析并建立相应模型，得到分型区分的特征峰。 结果 57株肺炎克雷伯菌中有28株携带rmpA2毒力基因，MLST均为ST11型，其中拉丝试验阳性有5株；29株不携带rmpA2毒力基因，主要ST型为ST11(n＝23)，还包括ST15 (n＝3)，ST1、ST76和ST473各一株。质谱将肺炎克雷伯菌较清晰地划分成两个区域，ClinProTools软件可准确区分84.2%(48/57)的菌株。ClinProTools软件四种算法结果基本相似，SVM特异性和灵敏度最高，分别为93.23%和100%。采用ClinProTools对质谱峰进行统计显示，得到区分rmpA2基因阳性组和阴性组的2个特征峰分别为7 168.9和7 280.76，在峰强度上存在一定的差异。 结论 MALDI-TOF MS快速区分携带rmpA2毒力基因的高毒力肺炎克雷伯菌方法灵敏度和特异性都在90%以上，得到两个特征峰在峰强度上存在一定差异，需进一步验证。(中华检验医学杂志，2018, 41：571-576)

目的 探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)在临床曲霉菌属鉴定中的应用，并评价其鉴定性能。 方法 以ITS测序结果为金标准，对解放军总医院2017年5月至2018年4月临床分离的曲霉菌属采用VITEK MS V3.0进行鉴定，并对结果进行分析。 结果 通过V3.0数据库(含12种曲霉菌图谱)鉴定了9种曲霉菌，占总体分离菌株的86.24%。VITEK MSV3.0的鉴定符合率为91.49%，未获得结果的占16.51%；菌属符合率为93.62%，其中仅有两株杂色曲霉鉴定到属水平。根据鉴定置信度进行统计，88.30%的菌株获得了99%以上的鉴定率。首次未获得鉴定结果的占13.83%，鉴定错误率3.19%，二次提取后再次进行质谱鉴定未鉴定菌株降低到6.38%，鉴定错误率降到2.13%；结合传统鉴定和VITEK MS鉴定手段，属正确率为98.94%，种正确率为93.62%；其他真菌对曲霉菌鉴定的影响度为0%。 结论 MALDI-TOF MS作为传统鉴定方法的有力补充，应用于曲霉菌鉴定给工作带了很多便捷，提高了种水平鉴定准确率，使得真菌实验室鉴定水平得到了提高。(中华检验医学杂志，2018, 41：577-582)

目的 建立新型弯曲菌—"胎儿弯曲菌龟亚种(C.fetus subsp.testudinum)"质谱超级图谱库，为临床提供新的检测平台。 方法 对收集的建库菌株采用Illumina二代测序平台2000/miSeq进行高通量全基因组测序，JAVA 8运行环境，进行直系同源基因的全基因组平均核苷酸一致性(average nucleotide identity，OrthoANI)分析；对收集的实验菌株、标准菌株及对照菌株进行质谱分析，建立"C.fetus subsp.testudinum"的超级图谱并验证。 结果 OrthoANI分析得出：建库菌株与模式菌株C.fetus subsp.testudinum03－427的OrthoANI值为：99.30%～99.96%，而其与C.fetus subsp.venerealisNCTC10354、C.fetus subsp.fetus82－40的OrthoANI值在91.05%～92.26%。参考OrthoANI≥95%作为同一菌种的判定依据，故将建库菌株最终鉴定为"胎儿弯曲菌龟亚种"。新建的超级图谱库鉴定准确率100%(与基因测序一致)，可信度区间为：82.3%～99.9%，同一菌株鉴定重复性100%。 结论 基于高通量测序及全基因组学分析的微生物分类新"金标准"为实验室质谱自建库提供了理想的参考价值，而建立准确、客观的"C.fetus subsp.testudinum"质谱超级参考图谱，为临床快速诊断胎儿弯曲菌感染提供了新的平台。(中华检验医学杂志，2018, 41：583－588)

目的 评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI－TOF MS)技术对碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKPN)同源性分析的能力。 方法 收集山东大学附属省立医院儿科病房及心外科病房2011年4月至2013年10月分离的21株CRKPN菌株，分别采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)、多位点序列分型(MLST)及MALDI－TOF MS技术进行回顾性同源性分析。 结果 MALDI－TOF MS将21株CRKPN菌株根据亲缘关系远近分为三群，其中17例菌株为II群，同源性高于75%，从获得的17株菌的蛋白质谱图结果分析，其蛋白峰大致一致，由此推断其亲缘关系比较接近，与PFGE和MLST结果基本一致。而同源性较低(<60%)的H13与上述菌株存在差异，尤其在分子量4365、5381及6289处蛋白峰有显著差异，PFGE分析显示H13与其他菌株的同源性为61.0%，MLST分型为ST54。 结论 MALDI－TOF MS技术能够准确对碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌进行同源性分析，较之其他同源性分析方法，快速方便，可满足医院感染工作的需求，及时防止耐药菌株在医院感染的爆发与流行。(中华检验医学杂志，2018, 41：589－595)

目的 分析100例育龄妇女(其中50例为妊娠妇女)外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)感染光滑假丝酵母菌的基因分型和药物敏感性结果，以了解贵阳地区育龄妇女VVC感染光滑假丝酵母菌的基因多态性和药物敏感性特征，并探讨基因多态性与妊娠状态、耐药性的相关性。 方法 运用多位点序列分型(MLST)技术，对100株光滑假丝酵母菌的6个管家基因进行测序分析，确定菌株序列型(ST) 。采用MEGA6.0软件中的加权配对组平均法和最小生成树法，比较分析不同菌株间的微进化及亲缘关系；采用ATB FUNGUS药物敏感性分析系统进行药物敏感性试验；运用Fisher和Ridit分析方法探究光滑假丝酵母菌的基因型与妊娠状态、耐药性的关系。 结果 100株光滑假丝酵母菌经MLST分型，得到34个ST型，其中ST－7 53株(来自妊娠妇女26株)，ST－3 7株(来自妊娠妇女3株)，ST－19 6株(来自妊娠妇女5株)，ST－15 3株(来自妊娠妇女1株)，ST－10 2株(来自妊娠妇女2株)，其余ST型各为1株。100株光滑假丝酵母菌对两性霉素B和氟胞嘧啶均敏感，伊曲康唑抑菌效果较差，仅20%为敏感，对氟康唑和伏立康唑的耐药率为4%和1%；伏立康唑耐药组中，仅ST－X1对伏立康唑耐药，其他基因型均敏感；不同基因型对伊曲康唑耐药性的相关性研究中，以ST－7为标准组，ST－15、ST－19及其他ST组均不包含标准组的平均Ridit值(0.5)。使用邻接法(NJ)构建系统进化树，将所有基因型分为3群，记作Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。其中Ⅰ群44株，Ⅱ群53株，Ⅲ群3株。所有收集的临床菌株在分子进化中遗传距离较小。 结论 ST－7为贵阳地区VVC光滑假丝酵母菌中优势菌株；不同基因型与妊娠状态没有相关性；ST－7与ST－15、ST－19及其他ST组的光滑假丝酵母菌对伊曲康唑的耐药性具有差异性；贵阳地区VVC光滑假丝酵母菌呈现出基因的高度多态性，基因多态性的ST之间的遗传距离小。(中华检验医学杂志，2018, 41：596－600)

目的 建立可用于血液分析检验结果自动审核的规则，为血液分析不同检测系统提供建立和验证自动审核规则的思路，在保证检验质量的同时缩短TAT时间。 方法 多中心研究收集来自吉林大学第一医院等八家医院检验科2017年1月至11月期间的EDTA－K2抗凝血常规样本共34 629例：规则建立组3 478例，其中差值检查(Delta check)288例；规则验证组5 362例，其中Delta check 2 494例；临床试应用组25 789例。应用Sysmex XN系列全自动血液分析仪检测血常规，同时制备血涂片、染色、镜检，将临床信息、设备参数、检测结果和镜检结果汇总；利用统计学方法筛选自动审核条件(包括项目和cut－off值)；将自动审核条件录入仪器软件；进行模拟条件的一期验证以及检测后样本二期验证，分别计算真阴性、假阴性、真阳性、假阳性、自动审核通过率和通过正确率；应用确定的自动审核条件自动审核血常规结果验证漏检率、得出自动审核通过率和TAT时间。 结果 (1)自动审核规则涉及白细胞、红细胞、血小板、Delta check及性状异常共43条。(2)规则建立组中3 190例样本其假阴性为1.94%(62/3 190)(P<0.001)，自动审核通过率为76.74%、通过正确率为97.47%；规则验证组中2 868例样本其假阴性为3.38%(97/2 868)(P＝0.002)，自动审核通过率为42.26%、通过正确率为92.00%；规则建立组288例和规则验证组2 494例Delta check假阴性分别为1.39%和2.61%(P<0.001)。(3)三家医院试应用自动审核规则，检测的25 789例血常规样本，检验结果报告平均TAT缩短分别为24、32、7 min，30 min内发报告率分别提高33%、53%和7%，自动核通过率为72%～74%。 结论 应用血液分析自动审核规则43条能够在保证检验质量的同时缩短TAT，提高血常规检验工作效率。值得指出的是，在临床应用时，对于与本研究相同型号的检测系统，应用前应进行验证，并在应用中做周期性验证；对于不同型号的检测系统，本研究提供其建立血液分析自动审核规则的方法，可结合检测系统的技术参数建立适合各自的自动审核规则。(中华检验医学杂志，2018, 41：601－607)

目的 探讨脑脊液脂蛋白脂肪酶(LPL)和mRNA水平对视网膜母细胞瘤患儿病情的评估价值。 方法 诊断试验研究。收集2015年10月至2017年5月首都医科大学附属北京同仁医院收治及规范化疗的视网膜母细胞瘤患儿36例，其中19例诊断为视网膜母细胞瘤中枢神经系统转移患儿(CNS转移组)，并依据眼别、年龄、性别选择同期北京同仁医院17例眼外期视网膜母细胞瘤患儿(非CNS转移组)。19例CNS转移组和17例非CNS转移组均在化疗前、化疗中(第3个周期)和化疗后(第6个周期)测定血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)和脑脊液的NSE、氯化物、葡萄糖、蛋白定量及白细胞计数的变化，应用Western blot法检测脑脊液LPL蛋白和RT－PCR法检测脑脊液LPL－mRNA的水平。一般资料行两样本t检验，计量数据以均值±标准差表示，行两样本方差分析。 结果 CNS转移组CSF－NSE水平明显高于非CNS转移组(F＝16.43，P＝0.002); CNS转移组在化疗前血清NSE水平明显高于非CNS转移组(F＝41.06，P＝0.006)，且CNS转移组化疗前后血清NSE水平变化有统计学意义(F＝7.06，P＝0.001)。CNS转移组CSF－LPL蛋白明显高于非CNS转移组(F＝2.57，P＝0.001) ，且在化疗前、中、后的脑脊液LPL蛋白表达差异具有统计学意义(F＝2.63，P＝0.003))。 结论 脑脊液LPL蛋白表达水平对视网膜母细胞瘤中枢神经系统转移患儿病情有一定指导意义。(中华检验医学杂志，2018, 41：608－614)

目的 建立一种基于化学发光免疫分析法(CLIA)原理检测血清人附睾蛋白4(HE4)的方法，并进行方法性能验证。 方法 利用一对HE4单克隆抗体分别偶联异硫氰酸荧光素(FITC)和碱性磷酸酶(ALP)，建立一个测定血清HE4的双抗体夹心的化学发光法。通过磁珠结合抗FITC抗体进行分离，加入ALP底物后光信号值与HE4浓度成正比。然后对方法的精密度、准确度、线性范围、特异性和稳定性等进行初步评价；并与市场上已有的国外进口HE4测定试剂盒比较。 结果 方法的重复性精密度和日间精密度分别小于4.0%和5.0%；回收实验在90.0%～110.0%范围内；最低检出限和功能灵敏度分别为5.0 pmol/L和为15.0 pmol/L；线性范围是15.0～1 500.0 pmol/L；试剂可以稳定12个月；与市场上已有进口试剂盒比对，其相关系数均大于0.99；本研究方法曲线下面积为0.896其他两种方法分别为为0.895和0.900。 结论 本研究建立了一种敏感、重复性好和线性范围宽的血清HE4化学发光法。(中华检验医学杂志，2018, 41：615-620)

近年来，针对恶性肿瘤患者血液中循环肿瘤细胞(CTC)、循环肿瘤DNA(ctDNA)和外泌体(exosomes)的液体活检(liquid biopsy)引起了医疗领域的巨大关注。与传统的组织活检相比，液体活检具有实时、全面、无创等优势。其检测技术的发展为肿瘤的精准诊疗开辟了新的途径，使得液体活检能够应用于肿瘤的早期筛查、诊断、治疗、疗效评估以及预后判断等众多领域。本文将从检测技术及临床应用等方面就近年来有关CTC、ctDNA及外泌体的研究进行阐述。(中华检验医学杂志，2018, 41：621－626)

医疗数据结构混杂、特征高维，传统数据仓储策略已难以满足大数据分析需求。以数据中产生模型的算法为主要研究内容的机器学习，迅即成为计算机模拟人类学习过程中智能数据分析技术的创新源泉。本文对机器学习的发展及其现处的医疗大数据背景作以简介，着重介绍其在检验医学图像识别、报告自动审核、中文医学语言处理及计算机辅助诊断中的应用，并思考其对检验医学发展带来的机遇与挑战。(中华检验医学杂志，2018, 41：627－630)