2022年 · 第45卷第02期

目的 全面介绍2020年全国细菌耐药现状。 方法 选取2019年10月至2020年9月全国细菌耐药监测网成员单位共计1 371所医院的监测数据，对纳入统计的3 249 123株细菌的主要分析指标、主要分离细菌对常用抗菌药物的敏感性、临床常见耐药菌的比较、重要耐药菌的检出进行分析。 结果 碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌的检出率呈现缓慢上升趋势，其他临床常见耐药菌的检出率呈下降趋势或持平；耐药菌的检出率存在人群及地域性的差异；重要耐药病原菌检出率的地域分布具有一定规律。 结论 应加强医疗机构抗菌药物的监管，提高医院感染防控能力。

当前多种新型微生物快速诊断技术应用于临床，亟需遵照5R原则，多学科合作建立有效的诊断管理体系，即针对恰当患者，在恰当时间开展恰当的检测、进行恰当的报告和解读。诊断管理可充分发挥常规技术和新型技术的优势，最大程度改善临床实践、节省医疗花费，遏制耐药的发展。

病原体宏基因组高通量测序（mNGS）检测流程高度复杂，对环境、设备和人员技术能力要求高。如何在本地化有序发展、规范管理及合理使用mNGS技术，是从业者必须审慎对待的科学课题。本文对mNGS医院实验室本地化系统的建立模式，检测系统的分析性能确认，来自生物因子、检测流程、生物信息学分析及信息传输的风险管理，以及适用于临床的病原体数据库、生物信息学分析人才和诊断报告的需求等几个层面的问题进行了思考和讨论，以促进mNGS在医院内规范应用和健康发展。

血液培养是临床微生物学实验室最重要的检查之一，是诊断血流感染、菌血症的金标准。专家组对血液培养技术辅助血流感染诊断的临床应用进行了讨论，并对一些关键问题给出了共识性观点。共识包括术语、适应证、标本采集与运送、分析中检测、分析中问题处理、分析后相关工作和结果解释、分析后会诊和诊断标准7个部分，近百条建议。希望能为临床诊断和处置、实验室工作提供合理、实用的帮助。

目的 评价通过优化血培养工作流程的方式是否可以缩短菌血症标本血培养阳性报警时间（TTP）、阳性报警到审核时间（阳性报警后处理时间）和标本周转时间（TAT）。 方法 本实验采用回顾性研究。对北京大学人民医院2014年1月1日至2021年6月30日收集的阳性血培养标本进行阶段性分析研究。本研究中的传统流程阶段（2014年），共纳入分析阳性血培养标本502瓶；流程优化第一阶段（2016年），较传统流程阶段延长了工作人员在岗时间至22：00，共纳入分析阳性血培养标本976瓶；流程优化第二阶段（2018年），较流程优化第一阶段增加了质谱快速鉴定流程，共纳入阳性血培养标本1 029瓶；流程优化第三阶段（2020年），较流程优化第二阶段引入新型VIRTUO BACT/ALERT血培养系统。比较不同阶段中血培养阳性报警时间、血培养阳性报警后处理时间和标本周转时间的差异。统计分析采用秩和检验。 结果 在传统流程阶段（2014年），阳性报警后处理时间为55.70（47.35，68.45）h；流程优化第一阶段（2016年），阳性报警后处理时间为47.25（33.88，59.96）h，流程优化第一阶段阳性报警后处理时间明显短于传统流程阶段（Z=‒10.734，P<0.001）；流程优化第二阶段（2018年）阳性报警后处理时间为47.18（36.41，59.40）h，在17：00之前12.18%革兰阴性杆菌的初步鉴定结果可以在审核前回报临床；流程优化第三阶段（2020年），原有BACT/ALERT 3D系统的血培养标本TTP为39.56（21.52，62.65）h，TAT为78.16（64.68，99.72）h；新型VIRTUO BACT/ALERT系统的血培养标本TTP为37.03（21.08，58.22）h，TAT为73.41（62.88，89.48）h，VIRTUO BACT/ALERT系统较BACT/ALERT 3D系统的TTP明显缩短（Z=‒2.273，P=0.023）；VIRTUO BACT/ALERT系统较BACT/ALERT 3D系统的TAT明显缩短（Z=‒4.040，P<0.001）。 结论 通过对微生物实验室血培养工作流程进行多方面、多措施的持续改进，可缩短血培养中各阶段的处理时间，使临床获得受益。

目的 本研究旨在开发一种无需破坏细胞壁，准确、特异鉴别耳念珠菌及其近缘菌的新技术。 方法 于2021年在军事科学院军事医学研究院进行本研究。以柠檬酸钠还原法制备表面增强拉曼光谱（SERS）基底材料，通过SERS检测，使用SIMCA 14.1（瑞典Umetrics公司）软件对采集的SERS指纹谱数据进行正交偏最小二乘判别（OPLS-DA）分析。对4株耳念珠菌、4株希木龙念珠菌、3株Candida pseudohaemulonii和4株Candida duobushaemulonii进行有效检测和鉴别。 结果 在95%可信区间内，样本分析结果呈椭圆形。本研究所测的4种念珠菌可以很好地分开。R2X（cum）=0.629，R2Y（cum）=0.947，Q2（cum）=0.915，R2X、R2Y、Q2均为>0.5，且趋近于1，说明本研究的模型建立良好，且该模型具有较好的预测能力。拉曼光谱数据的十折交叉检验结果显示模型训练数据和测试数据的准确率均为100%，本研究建立的模型具有较好的分类能力，该方法能准确地检测和鉴别耳念珠菌及其近缘菌株。 结论 本研究开发了一种无需破坏细胞壁，准确、特异、快速鉴别耳念珠菌及其近缘菌的新技术，成本低，操作简单，在临床检验上具有良好的应用潜力。

目的 探讨组氨酸激酶AgrC在亚抑菌浓度环丙沙星促进金黄色葡萄球菌生物膜形成中的作用机制，为金黄色葡萄球菌生物膜相关感染的治疗提供新的思路。 方法 于2021年中南大学湘雅三医院检验科收集皮肤组织和体液标本，采用微量肉汤稀释法测定环丙沙星对实验菌株的最低抑菌浓度；采用结晶紫染色法观察不同亚抑菌浓度环丙沙星处理金黄色葡萄球菌后的生物膜形成情况；利用SYTO9和PI荧光染料分析亚抑菌浓度环丙沙星对金黄色葡萄球菌生物膜形成的影响；通过逆转录荧光定量PCR检测亚抑菌浓度环丙沙星对金黄色葡萄球菌agrC基因及其调控基因agrA、icaA和icaR的表达水平的影响；最后，通过等温滴定量热法验证亚抑菌浓度环丙沙星与AgrC蛋白受体的结合作用；数据采用x¯±s表示，服从正态分布和方差齐性则采用方差分析，否则采用非参数检验，以P<0.05为差异有统计学意义。 结果 药敏试验结果显示环丙沙星对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为0.25~0.5 mg/L。亚抑菌浓度的环丙沙星可促进金黄色葡萄球菌生物膜的形成，在1/4倍最低抑菌浓度即可开始出现显著作用［ATCC 43 300（t=7.42，P=0.002）、临床菌株SA1（t=5.42，P=0.005）、SA2（t=6.38，P=0.002）、SA3（t=4.8，P=0.009）、SA4（t=7.06，P=0.002）和SA5（t=4.36，P=0.004）］。激光共聚焦显微镜观察发现亚抑菌浓度的环丙沙星可明显促进金黄色葡萄球菌生物膜的形成，增加生物膜的形成量并使生物膜显著聚集成三维立体结构。逆转录荧光定量PCR结果显示，亚抑菌浓度的环丙沙星对agrC基因表达水平无显著影响，但使agrA（t=4.42，P=0.003）和icaR（t=4.49，P=0.007）表达水平下降［（0.61±0.24）和（0.56±0.12）］，icaA表达水平升高［1.51±0.19（t=5.24，P=0.009）］，差异有统计学意义。等温滴定量热法分析发现，环丙沙星与AgrC蛋白受体具有较好的结合力。 结论 亚抑菌浓度环丙沙星可能通过结合AgrC蛋白受体，影响下游agrA、icaA和icaR基因表达水平，从而促进生物膜形成，增加金黄色葡萄球菌的抗菌药物耐药性。

目的 分析2011至2018年无锡市鼠伤寒沙门菌分离株耐药情况和分子分型。 方法 选取无锡市2011至2018年从各类监测样本中分离的109株鼠伤寒沙门菌，采用微量肉汤稀释法对菌株进行17种抗菌药物的敏感试验，并用脉冲场凝胶电泳进行分子分型。耐药性的比较采用χ²检验。 结果 109株鼠伤寒沙门菌对四环素和氨苄西林耐药率最高，分别为69.72%（76/109）和68.81%（75/109）；对复方磺胺甲噁唑、氯霉素、环丙沙星、氨苄西林/舒巴坦、阿奇霉素、呋喃妥因、头孢噻肟、氨曲南的耐药率分别为23.85%（26/109）、22.02%（24/109）、11.93%（13/109）、4.59%（5/109）、3.67%（4/109）、3.67%（4/109）、0.92%（1/109）、0.92%（1/109）；对阿米卡星、厄他培南、亚胺培南、美罗培南、头孢他啶、头孢他啶-阿维巴坦均敏感；对阿奇霉素的耐药逐年下降，2018年开始出现对氨曲南、头孢噻肟的耐药，对氯霉素、复方磺胺甲噁唑的耐药呈上升趋势。有31株菌对3种及以上抗菌药物有不同程度的耐药，多重耐药率为28.%（31/109）。109株鼠伤寒沙门菌经聚类分析可分为85个带型（N1~N85），相似度57.3%~100%。 结论 无锡市鼠伤寒沙门菌对四环素和氨苄西林的耐药性较高，基因型与表型之间具有较大的变异性。

目的 基于超速离心改良法快速分离提取肺炎克雷伯菌分泌的外膜囊泡并进行鉴定和定量。 方法 将购于国家卫生健康委员会临床检验中心经典肺炎克雷伯菌（cKP）标准菌株和台湾大学馈赠高毒力肺炎克雷伯菌（hvKP）标准菌株分别置于M9基础培养基中培养9 h，利用超速离心改良法提取外膜囊泡（OMV），然后采用负染法于透射电子显微镜下观察其形态和大小，通过Stewart磷脂分析法进行相对定量，并采用两独立样本t检验进行两组间比较。 结果 透射电子显微镜下观察发现，cKP和hvKP分泌OMV的形态大部分呈球形、囊状小泡结构，小部分形态不规则，OMV直径为20~250 nm，可见多个囊泡聚集成团，且hvKP分泌的OMV多于cKP。相对定量检测发现，hvKP分泌的OMV数量多于cKP，差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 通过超速离心改良法成功实现了肺炎克雷伯菌OMV提取、鉴定及定量检测，为后续OMV机制及功能研究奠定了基础，为抗细菌感染治疗提供了新思路。

目的 初步探究鲍曼不动杆菌对不动杆菌属细菌的生长抑制现象。 方法 2020年12月10日自河南省省立医院神经内科1例危重患者的肺泡灌洗液标本中分离到1株可抑制其他鲍曼不动杆菌生长的鲍曼不动杆菌分离株，命名为SL-A.baumannii。为进一步探究该抑制现象，收集40株不动杆菌分离株，比较抑制作用的发生率、分离株的同源性关系、药敏特征、蛋白质聚类分析等。 结果 对SL-A.baumannii进行多位点序列分型（MLST），等位基因gltA、gyrB、gdhB、recA、cpn60、gpi和rpoD编号为33、12、40、26、48、54和5，将其原始数据上传到PubMLST数据库后，获得了新的型别号ST-2442。该新型别鲍曼不动杆菌分离株SL-A.baumannii对36株不动杆菌（其中鲍曼不动杆菌30株、皮特不动杆菌3株、洛菲不动杆菌2株、沃森不动杆菌1株）的生长有明显的抑制作用，抑制率达90%（36/40）；受其抑制的这36株分离株中全敏感型18株（50%）、多重耐药菌16株（44.44%，含全耐药菌2株、泛耐药菌11株）、其他耐药型2株（5.56%）。 结论 SL-A.baumannii（PubMLST/鲍曼不动杆菌分离株数据库/编号：6942）这一新型别（ST-2442）的鲍曼不动杆菌野生分离株对不同耐药表型的不动杆菌属细菌生长有显著的抑制作用。

目的 分析天津市1例输入性基孔肯亚病毒（CHIKV）的全基因组序列特征与进化，为CHIKV的监测与防控提供科学依据。 方法 收集2019年11月4日于天津市第二人民医院采集的血清标本200 μl提取核酸，设计叠瓦式引物扩增CHIKV基因组全长，然后利用Illumina Miniseq平台进行高通量测序。 结果 本研究的CHIKV属于ECSA基因型印度洋分支，与大部分中国分离株一致，相似性为92.72%~99.86%，在国际上与巴基斯坦分离株亲缘关系最近（99.74%）。天津CHIKV在关键位点E1-D284E和E2-I211T处有两处突变，与ECSA基因型一致。此外，天津CHIKV还具备两个关键毒力位点E2-12T和E2-82G，以及nsP3-R524Opal终止子突变。 结论 天津CHIKV具备较强毒力，且具备在白纹伊蚊中传播的能力，提示应继续加强对CHIKV的监测。

目的 制备一种用于血糖即时检测（POCT）的人源全血质控物，并对其均匀性、稳定性及基质效应进行评价。 方法 将临床验后静脉全血样本分离、固定、洗涤、过滤和分装后，制备成高、中、低3个浓度的人源全血质控物，参照中国合格评定国家认可委员会（CNAS）GL29∶2010《标准物质/标准样品定制的一般原则和统计方法》对其均匀性和稳定性进行评价；在POCT血糖检测系统中，采用美国临床实验室标准化委员会（CLSI）EP14-A3中的Deming回归对其基质效应进行评价；质控物应用于室内质量控制，并计算其检测结果的变异系数（CV）。采用单因子方差分析和t检验法对检验中的结果进行统计。 结果 3个浓度水平质控物的均匀性良好［F<F0.05（9，20）］；在2~8 ℃条件下，质控物开瓶后可稳定10 d，未开瓶15 d内的短期稳定性良好，结果与第1天比较，差异无统计学意义（P>0.05）；质控物适用于10款POCT血糖检测系统，无基质效应；室内质控结果显示高、中、低3个浓度CV分别为0.63%、0.66%和1.65%，均小于7.5%。 结论 该自制人源全血质控物具有良好的均匀性、稳定性和适用性，可满足临床对POCT血糖检测的质量控制要求，具有较好的应用前景。

目的 探讨血清25-羟维生素D［25（OH）D］、白蛋白/纤维蛋白原比值（AFR）水平在类风湿关节炎（RA）中的变化及意义。 方法 回顾性研究2017年5月至2020年1月亳州市人民医院诊断明确的131例患者，其中95例RA患者为RA组，36例排除自身免疫疾病的关节痛患者为疾病对照组，选取同期40名体检健康者为健康对照组。RA组以基于28个关节计数和C反应蛋白水平的疾病活动度（DAS28-CRP）评分分为高度（>5.1分，25例）、中度（3.2分<DAS28-CRP≤5.1分，40例）、低度（≤3.2分，30例）疾病活动亚组；以血清25（OH）D水平分为正常（≥30 ng/ml，17例）、不足（20 ng/ml≤25（OH）D<30 ng/ml，31例）和缺乏（<20 ng/ml，47例）3个亚组；以年龄分为≤44岁（21例）、45~59岁（43例）、60~74岁（21例）、≥75岁（10例）4个亚组；以性别分为女（79例）、男（16例）2个亚组。分析其血清25（OH）D、白蛋白（ALB）及纤维蛋白原（Fib）水平，同时计算AFR。采集患者一般临床资料及实验室指标进行统计分析。用Spearman相关分析RA患者DAS28-CRP评分与实验室指标间的相关性，Logistic回归模型评价RA独立危险因素。 结果 RA组25（OH）D和AFR水平低于疾病对照组和健康对照组（P均<0.001），RA组25（OH）D水平缺乏/不足率为82.11%（78/95）；不同年龄亚组的25（OH）D水平差异有统计学意义（P<0.05），且女性明显低于男性（P<0.05）；相关性分析显示AFR与DAS28-CRP评分呈显著负相关（r=-0.497，P<0.01）；Logistic回归分析显示25（OH）D（OR=0.852，95%CI 0.768~0.944，P=0.002）、AFR（OR=0.626，95%CI 0.480~0.817，P=0.001）、类风湿因子免疫球蛋白M（OR=1.044，95%CI 1.019~1.069，P<0.001）、抗环瓜氨酸肽抗体（OR=1.017，95%CI 1.002~1.032，P=0.030）均是RA患者疾病活动度的独立危险因素。 结论 RA患者血清25（OH）D及AFR水平较低且普遍存在25（OH）D缺乏/不足的现象，低水平的25（OH）D和AFR可作为RA患者疾病活动度评估的危险因素。

患者因“胸痛、皮疹、淋巴结肿大2年余，全身疼痛8个月，体重近半年下降15 kg”于 2020年9月15日就诊于北京协和医院。患者有胸痛、咳嗽、咳痰等，经验性使用头孢类抗感染和对症治疗，症状缓解，但出现药物性皮疹，抗过敏治疗后皮疹缓解。颈部淋巴结肿大无缓解，活检提示多灶性肉芽肿性炎，予诊断性抗结核治疗，淋巴结有所缩小，但病情反复，继而出现全身疼痛，完善检查提示右肺上叶肺癌伴阻塞性肺炎，伴全身多部位转移。患者无明确免疫抑制病史，γ干扰素抗体强阳性，考虑成人起病的免疫缺陷综合征，淋巴瘤和感染不除外。为明确诊断需进行骨穿和组织活检，但患者不配合。既往右颈部淋巴结和左侧髂骨活检组织病理学弱抗酸阳性，疑似诺卡菌感染，经验性用磺胺和亚胺培南抗诺卡菌治疗好转，宏基因组高通量测序结果为马内菲蓝状菌，含量较低，对此少见病原菌，积极完善实验室病原学检查培养阳性后，停用抗诺卡菌治疗，开始抗真菌治疗（两性霉素B联合伊曲康唑），2个月后患者全身结节和包块消失，皮肤创面愈合。患者标本取材合格性、实验室与临床之间及时沟通，及宏基因组高通量测序技术结果的合理解读，对患者的诊治具有重要意义。

患者，50岁男性，2020年4月1日以“高处坠落致志不清伴呕吐1 h”为主诉入院，拟急诊行“开颅减压术”。术后3 d出现间歇性发热，最高38 ℃，血液标本炎症指标均高于参考值上限，经验性抗感染治疗，仍反复发热。4月12日患者脑脊液标本常规与生化检测指标提示颅内感染，予以万古霉素联合美罗培南治疗。脑脊液与血液标本培养48 h后，见针尖样、透明小菌落生长，经16S rRNA基因鉴定结果为人型支原体。患者最终因病情严重且并发症多，治疗无效判定死亡。

针对目前国内外新型冠状病毒肺炎疫情防控形势的重大变化，“外防输入、内防反弹”已成为我国疫情防控的工作重点。由于检测场地、仪器设备以及反应时间的限制，传统的检测技术无法满足新型冠状病毒即时快速检测的需要。即时检测技术所具备的快速、便携、灵活等优点使得其在新型冠状病毒的快速检测和筛查工作中发挥着越来越重要的作用。本文从抗原、特异性抗体和核酸等方面对新型冠状病毒的即时检测技术现状及研究进展进行综述，以期为疫情防控和临床诊治提供参考。