2009年 · 第32卷第08期

人们对病毒性疾病的危害已有共识,不断发展的新技术使得病毒病原的检测和确定变得更加敏感、特异且快速.病毒病原的诊断和确定由于临床医学和药物研究的发展和需求显得越来越重要,如何选择诊断方法,是正确诊断病原的关键.在当前病毒性疾病防治工作中,亟须规范、高质量、有批准文号、可用于临床实验室的病原学诊断试剂盒的面世。

急性呼吸道疾病(acute respiratory disease,ARD)在发达国家急性病中发生率占75%,其中约80%是病毒性的,它们引起急性上呼吸道感染(upper respiratory tract infections,URTI),如鼻炎、咽炎和喉炎等.随着URTI病情进展,可导致哮喘急性发作、急性中耳炎和下呼吸道感染(lower respiratory tract infection,LRTI),如支气管炎和肺炎[1]。

代谢组学(metabonomics/metabolomics)由英国Nicholson教授及同事于1999年正式提出[1].其中,代谢组系指"一个细胞、组织或器官中所有的小分子物质";而代谢组学为一门动态、系统地研究机体受外源性刺激产生的代谢图谱及其变化规律的科学.传统的代谢概念既包括生物合成,也包括生物分解。

目的 了解铜绿假单胞菌中OXA型超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的检出率及其基因分布情况.方法 收集2006年10月至2007年1月中南大学湘雅医院临床标本分离的非重复铜绿假单胞菌97株,用PCR进行OXA型ESBLs基因型的检测,对PCR产物进行测序并确定其基因型.结果 97株铜绿假单胞菌经PCR扩增发现3株菌的质粒上携带OXA型ESBLs,OXA型酶的检出率为3.1%(3/97).3株质粒DNA OXA-PCR产物测序序列经GenBank网上同源性比较,未发现完全相同的核苷酸和氨基酸序列,为新发现的OXA型ESBLs耐药基因,分别命名为blaOXA-128和blaOXA-129,已经注册到GenBank数据库,GenBank号分别为EU573214和573215.结论 中南大学湘雅医院已经存在携带OXA型超广谱酶铜绿假单胞菌感染发现了铜绿假单胞菌携带的两个新的OXA型ESBLs耐药基因。

目的 探讨健康人群短期饮酒前后血清糖缺失转铁蛋白水平及其他生化指标的变化趋势.方法 受试者按规定酒精量饮酒1周,于饮酒前、饮酒后、停酒1周、停酒2周分别检测血清糖缺失转铁蛋白(carbohydrate-deficient transferrin,COT)、转铁蛋白(Tf)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)、ALT、AST和碱性磷酸酶(AKP)、血清铁(Fe)和血糖(Glu)水平;统计学分析采用t检验,比较不同时间点各观测指标间的差异,并将所有受试者按性别、是否吸烟、是否有饮酒史分组,比较不同时间点CDT、糖缺失转铁蛋白百分比(CDT%)水平变化.结果 健康人群血清CDT水平参考区间为(33.6±13.0)mg/L(x±2s),饮酒前血清CDT及CDT%水平分别为(33.6±6.6)mg/L、(1.4±0.2)%,饮酒后分别为(39.9±9.0)mg/L、(1.6±0.4)%,停酒1周分别为(36.2±6.7)mg/L、(1.5±0.2)%,停酒2周分别为(32.3±8.8)mg/L、(1.4±0.3)%.饮酒后、停酒1周分别与饮酒前CDT值比较,t值分别为-9.1、-5.1,P均<0.01,差异有统计学意义;停酒2周与饮酒前血清CDT值比较,t=1.1,P>0.05.饮酒后、停酒1周分别与饮酒前CDT%值比较,t值为-5.3、-5.4,P均<0.01;停酒2周与饮酒前血清CDT%值比较,t=2.5,P>0.05.按性别、是否吸烟、是否有饮酒史分组后,CDT及CDT%在饮酒前、饮酒后、停酒1周和停酒2周的组间比较差异均无统计学意义;AKP水平在饮酒前、饮酒后、停酒1周和停酒2周分别为(64.1±19.9)、(65.3±16.9)、(76.9±20.4)及(64.9±16.4)U/L,即于停酒1周后达峰值,停酒1周与饮酒后相比差异有统计学意义(t=-6.704,P<0.01).结论 血清CDT及CDT%水平于停酒后达峰值,于2周后恢复到基础水平,且不受性别、吸烟和饮酒的影响,可作为对健康人群近期饮酒情况的监测指标。

目的 了解南京医科大学第一附属医院2004-2007年血培养阳性标本的病原菌分布和耐药性变迁.方法 采用BacT/Alert 3D血培养仪;细菌及真菌鉴定采用API系统;细菌药物敏感性测定采用纸片扩散法(K-B法),真菌药物敏感性测定采用Rosco纸片法;Whonet 5.3软件进行统计分析.结果 2004-2007年南京医科大学第一附属医院血培养共分离出病原菌1 313株,阳性率分别为13.1%(292/2 226)、13.2%(327/2 471)、13.3%(342/2 563)和10.6%(352/3 366).血培养阳性菌多见于血液科、ICU、传染科、普通外科及老年医学科.检出率较高的革兰阳性菌主要为凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)和金黄色葡萄球菌,其中耐甲氧西林株分别占32.9%(171/520)和39.2%(51/310).葡萄球菌和肠球菌中均未发现对万古霉素和替考拉宁的耐药株.检出率较高的革兰阴性菌主要为大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌和不动杆菌.铜绿假单胞菌和不动杆菌对多种抗菌药物耐药率较高,肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药高度敏感.结论 血培养检出病原菌种类复杂,对多种抗菌药物耐药,应引起重视。

目的 比较评价结核分枝杆菌特异性细胞免疫检测与抗体免疫检测在结核诊断中的应用价值.方法 分别采用免疫胶体金技术及结核分枝杆菌抗原ESAT-6特异性IFN-γ酶联免疫斑点检测技术(ELISPOT)对113例结核病患者和90名健康对照进行结核菌特异性抗体免疫和细胞免疫测试;对健康对照还采用PPD皮试进行细胞免疫检测.对12例结核患者和10名健康对照同时采用ELISPOT和T-SPOT.TB试剂盒进行平行检测.结果 ELISPOT检测的阳性阈值判定根据受试者操作特征(ROC)曲线分析获得最佧阈值为30个斑点/2×105个细胞,以此判断ESAT-6刺激后IFN-γ释放水平诊断结核病敏感度为75.2%,特异度为85.6%.在90名健康对照中,抗体检测和ELISPOT检测阳性率分别为26.67%和14.44%,PPD皮试强阳性的比例为27.78%;ELISPOT检测及抗体检测均与PPD皮试结果正相关(r值分别为0.280,0.253,P均<0.05).在113例结核患者中,ELISPOT检测和抗体检测的阳性率分别为77.88%和60.18%.ELISPOT检测对结核病辅助诊断的阳性预测值为86.27%、阴性预测值为75.25%,抗体检测分别为73.91%和59.46%;2种方法阳性预测值和阴性预测值比较差异均有统计学意义(χ2=3.941,P=0.047;χ2=5.268,P=0.022).采用T-SPOT.TB与ELISPOT检测结果进行配对比较,差异无统计学意义(χ2=0.500,P=0.480).结论 结核分枝杆菌ESAT-6抗原特异性IFN-γ的细胞免疫检测技术在结核病临床辅助诊断的应用价值显著高于结核菌特异性抗体检测,值得进一步优化和推广。

目的 探讨酶联免疫斑点检测(ELISPOT)斑点形成细胞(SFC)在结核潜伏感染中的诊断价值.方法 研究对象分为:结核组132例,健康对照组44名,有结核暴露史的健康者55名.应用克隆表达的早期分泌抗原靶6 KD/培养滤液蛋白10 KD融合蛋白(ESAT-6/CFP-10融合蛋白)、早期分泌抗原靶6KD(ESAT-6)进行ELISPOT,检测观察对象的SFC的数量,并对有结核暴露史者进行结核菌素试验(TST).结果 ESAT-6/CFP-10融合蛋白-ELISPOT、ESAT-6-ELISPOT在结核组形成SFC数量(肘分别为147.5和27.5)显著高于有结核暴露史健康组形成的SFC数量(M分别为30和10,P值分别为0.000和0.003);有结核暴露史健康组形成的SFC数量(M分别为30和10)显著高于健康对照形成SFC的数量(M分别为10和5,P均小于0.05).ESAT-6/CFP-10-EHSPOT与ESAT-6-ELISPOT比较,其与结核暴露史具有更明显的相关性(χ2=6.942,P=0.008),而两种ELISPOT检测均与BCG接种无关;TST与BCG接种显著相关(χ2=8.967,P=0.003).结论 ESAT-6-ELISPOT与结核菌素试验比较,ESAT-6/CFP-10融合蛋白-ELISPOT有可能根据SFC的数量来鉴别结核潜伏感染和活动性结核病,成为诊断结核潜伏感染的更加准确的方法。

目的 评价尿液跨膜丝氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)基因和ETS转录因子家族成员相关基因(ERG)融合体与前列腺特异性抗原(PSA)mRNA比值测定在前列腺癌诊断中价值.方法 建立TMPRSS2和ERG基因融合体(TMPRSS2:ERG)mRNA及PSA mRNA荧光定量逆转录(FQ-RT)-PCR检测方法,TMPRSS2:ERG mRNA/PSA mRNA比值以2-△Ct进行计算.同时,用该方法检测107例前列腺良性增生(BPH)患者和99例前列腺癌(PCa)患者尿液中的TMPRSS2:ERG mRNA/PSA mRNA比值,并分析该指标对PCa的诊断价值及与PCa临床分期、Gleason评分和PSA水平间的关系.结果 PCa组TMPRSS2:ERG mRNA/PSA mRNA比值明显高于BPH组(0.101比0.000;U=2 290.500,P<0.01);但其在PCa不同临床分期、Gleason评分、PSA组之间的差异均无统计学意义(χ2值分别为3.293、0.002、1.745,P均>0.05).TMPRSS2:ERG mRNA/PSA mRNA比值诊断PCa的ROC曲线下面积(AUC)为0.784(95%CI:0.707～0.860),当以3.0×10-5为临界值时,其诊断PCa的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确性分别为75.8%(75/99)、94.4%(101/107)、92.6%(75/81)、80.8%(101/125)和85.4%(176/206);但其敏感度在PCa不同临床分期、Gleason评分、PSA组之间的差异均无统计学意义(χ2值分别为3.572、2.278、3.707,P均>0.05).结论 尿液TMPRSS2:ERGmRNA/PSA mRNA比值在PCa诊断中具有较好的特异度和敏感度,有望成为PCa联合诊断的候选指标,但不能作为PCa病情监测和判断预后的指标。

目的 分析探讨HLA-A、HLA-B和HLA-DRB1基因低分辨相合无关供/受者对与HLA高分辨水平匹配的比例和特点.方法 对318份HLA-A、B和DRB1基因低分辨相合的无关供/受者对标本进行HLA测序分型,从高分辨水平统计和分析HLA各基因座匹配的比例和特点,以及HLA系统中6个等位基因(HLA-A、HLA-B和HLA-DRB1位点)、8个等位基因(HLA-A、HLA-B、HLA-Cw和HLA-DRB1位点)、10个等位基因(HLA-A、HLA-B、HLA-Cw、HLA-DRB1和HLA-DQB1位点)的匹配性.结果 单个HLA位点完全相合的比例为HLA-B[79.9%(254/318)]>HLA-DRBl[64.8%(206/318)]>HLA-DQB1[62.3%(134/215)]=HLA-A[62.3%(198/318)]>HLA-Cw[55.3%(119/215)].6个等位基因完全相合的比例为36.2%(115/318),8个等位基因完全相合的比例下降为21.9%(47/215),10个等位基因完全相合的比例为20.5%(44/215).在76份HLA-A、HLA-B和HLA-DRB1等位基因6/6相合的样本中,等位基因8/8相合及10/10相合的比例分别为63.2%(48/76)和57.9%(44/76);但其中1～2个HLA-Cw等位基因不相合的比例为36.8%(28/76),且主要为抗原水平不相合.结论 实现HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1的高分辨分型数据入库虽有助于提高无关供/受者对与HLA高分辨配型检索的成功率,但HLA-Cw抗原水平的不相合不能被忽视,建议将HLA-Cw基因分型纳入骨髓库骨髓志愿捐献者HLA入库数据的常规检测。

目的 探讨中国汉族人群中15个遗传性凝血因子Ⅺ(FⅪ)缺陷症家系中FⅪ基因突变分布特点和分子发病机制.方法 检测15例先证者血浆凝血因子Ⅺ促凝活性(FⅪ∶C)及凝血因子Ⅺ抗原(FⅪ∶Ag),并以外周血细胞中提取的基因组DNA为模板,PCR扩增FⅪ基因的所有外显子及其侧翼序列,经DNA测序检测FⅪ的基因突变.结果 在15个遗传性FⅪ缺陷症家系中共发现13种FⅪ基因突变,其中包括7种错义突变(Cys182Ser、Thr161Met、Arg308His、CyM82Trp、Gly400Val、Leu172Pro和Trp501Cys),5种无义突变(Trp501Stop、Arg479Stop、Trp228Stop、Gln263Stop和Trp383Stop),1种碱基缺失突变(1325t缺失).其中的Trp228Stop突变存在于7个家系中,可能为中国汉族人群中遗传性FⅪ缺陷症的突变热点.结论 所发现的13种FⅪ基因突变可能是导致中国汉族人遗传性FⅪ缺陷的分子发病机制。

目的 探索微流控芯片技术在精子优选中的应用价值.方法选取男性不育症患者70例,利用自制聚二甲基硅氧烷(PDMS)微流控芯片对其中40份精液标本进行分离,观察分离前后精子的活力、形态以及精子尾部肿胀率的变化.同时,采用密度梯度离心法对另外30份精液标本进行分选,获得的活动精子用芯片进行存活率试验,观察芯片材料PDMS对精子存活的影响.结果40份精液标本经芯片分选前后,精子活力从(29.4±8.1)%增高至(94.2±3.3)%,差异有统计学意义(t=24.58,P<0.01).正常形态精子百分率从(10.5±8.0)%增高至(30.0±5.5)%,差异有统计学意义(t=13.67,P<0.01).精子尾部肿胀率从(65.5±7.4)%提高到(96.0±1.8)%,差异有统计学意义(t=10.13,P<0.01).同时对30份精液标本应用夹角分别为30°与60°的芯片进行分离,发现夹角为30°的芯片对活动精子的分选同收率可达(40.4±5.5)%,其分离回收效率显著优于夹角为60°的芯片(28.5±8.0)%,且差异有统计学意义(t=6.78,P<0.001).此外,30份精液标本中的活精子经PDMS处理前、后精子活力分别为(71±3.4)%和(70±2.5)%,差异无统计学意义(t=0.65,P>0.05).结论PDMS微流控芯片在精子分选中能获得质量好的精子,且不需要对精液进行离心处理,减少了试验过程对精子的损伤,在体外受精精子的优选中有很好的应用前景。

感染性腹泻病是一组广泛分布并流行于世界各地的肠道传染病,其发病率高,传播速度快,对儿童的健康危害尤其严重.引起儿童腹泻的病原微生物主要包括细菌、病毒、原虫和真菌等,其中以细菌性腹泻病[1]及A群轮状病毒(RV)感染性腹泻病居多[2].然而近年来我们在临床工作中发现了部分RV与细菌混合感染引起儿童严重腹泻的病例,这在国内尚很少报道,本研究对这部分病例进行了总结分析,旨在提高对RV与细菌混合感染所致儿童腹泻病的认识。

目的 探讨尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,uPA)在3种乳腺癌细胞中表达的差异性及其意义.方法 分别用逆转录(RT)-PCR、荧光定量(FQ)-PCR、免疫印迹法(WB)和免疫细胞化学技术检测3个细胞系(乳腺癌低度侵袭转移细胞系MCF7、中度侵袭转移细胞系MDA231和高度转移细胞系BICR-H1)中uPA在mRNA、蛋白水平的差异表达.结果 经RT-PCR检测uPA结果显示,内参基因GAPDH在3种细胞系MCF7,MDA231,BICR-H1中的表达量相近,uPA基因在细胞系MCF7,BICR-H1中的表达未被检出,在MDA231细胞系中的表达有明显的227 bp条带;经FQ-PCR检测uPA基因结果显示,细胞系MDA231中uPA基因的交叉点值(CrossPoint,Cp值)为31.51,在细胞系BICR-H1和MCF7中uPA基因的Cp值相近,分别为36.93和36.73;WB和免疫细胞化学方法对蛋白水平检测显示,uPA蛋白在乳腺癌3个细胞系中的表达情况为BICR-H1>MDA231>MCF7(增强化学发光的灰度比为4.7∶3.15∶1).结论 乳腺癌细胞系中uPA蛋白的表达水平与细胞侵袭转移能力相关,检测uPA蛋白水平有可能成为今后乳腺癌病情监测及预后判断的重要指标。

目的 使用化学交联方法构建一种人-人抗体嵌合物作为抗-甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)IgM检测质控品,并探讨其在临床上的应用价值.方法 通过ELISA筛选出抗-HAV IgG阳性效价高的血清(HBsAg、抗-HCV、抗-HEV、HIV-1阴性),再以蛋白A柱纯化出高滴度IgG,以分子筛色谱纯化出健康人IgM.选择1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺作为化学交联剂将两者交联,得到的嵌合人-人IgG、IgM抗体既能和甲型肝炎病毒抗原(HAV-Ag)特异性结合,又能与检测体系中的抗μ链抗体特异结合.根据嵌合抗体的活性来确定交联反应的最佳条件,并对该嵌合抗体稳定性、干扰反应、交叉反应进行研究,同时以卫生部临床检验中心的抗-HAV IgM质控品作为对照研究该嵌合抗体的适用性.选用临床常用的3个厂家抗-HAV IgM检测试剂盒对本嵌合抗体进行检测.结果 本研究的最佳交联条件为IgG与IgM质量比5∶1(5 mg IgG∶1 mg IgM),1 mg IgM反应体系中加入10 mg交联剂,室温反应6～18 h.交联后得到了稳定的嵌合抗体产物,将该产物1∶1 000倍稀释后,检测值仍与卫生部临床检验中心发放的抗-HAV IgM质控品相当,S/CO值分别为2.96、3.12,能够作为抗-HAV IgM检测的阳性质控.该嵌合抗体在4℃及-20℃条件下均能稳定保存至少6周.IgG、IgM及交联剂不影响嵌合抗体的阳性检测结果,且该嵌合抗体与抗-HBc IgM、抗-HEV IgM检测不存在交叉反应.使用临床上常见的检测试剂盒检测结果均为阴性.结论 通过化学交联的方法成功构建了人-人嵌合抗体,可用作为抗-HAV IgM检测质控物。

目的 阐明极限参数的评价方法和实际应用.方法 主要参考临床和实验室标准协会发表的EP6-A和EP17-A文件,评价结合珠蛋白(Hp)检测方法的低限参数和肌酸激酶(CK)检测方法的高限参数.Hp采用免疫透射比浊法测定,CK采用国际临床化学和检验医学联合会推荐的速率法测定.结果 Hp的空白限值(LoB)为0.03 g/L,定量限值(toQ)为0.14 g/L,线性范围下限(LLR)为0.17 g/L,评价结果符合LoB<LoQ≤LLR的关系.CK临床可报告范围上限可达到10 000 U/L,使用灭活血清稀释CK活性超过线性范围上限(1 000 U/L)的样本.结论 定量检测方法的极限参数反映该方法测定范围及其检测能力,直接影响检测结果的准确性。

实验室自动化系统(LAS)又称临床实验室全自动检验流水线,是指将临床实验室相互有关或互不相关的自动化仪器串联起来,在临床实验室信息系统(LIS)的信息流管理支撑下,结合条形码技术,构成流水线作业的组合,形成大规模的临床实验室常规检验过程的自动化[1]。

患者男,33岁,彝族.2008年8月7日因无明显诱因出现咽部疼痛、吞咽不适,临床疑为"急性喉炎",给予甲硝唑、头孢氨苄缓释片治疗7 d,症状缓解.2008年8月25日上述症状再次发作,精神欠佳,中药治疗无缓解,查血常规:WBC1.9×109/L,RBC 4.07×1012/L,Hb 126 g/L,PLT 55×109/L,中性分叶核细胞0.34,淋巴细胞0.6,单核细胞0.06.临床以"白细胞、血小板减少,上呼吸道感染"收入院。

2008年9月25日出生男婴,9月26日出现黄疸,逐渐加重,经光照治疗无效,9月27日送至赤峰市中心血站检查.其母34岁,妊娠39周后分娩,无输血史.检查婴儿血型为B型,且血清中含有抗S抗体.给予新鲜全血换血治疗,患儿康复出院。

呼吸道感染是临床常见疾病,可由多种病原体引起.目前已证明,急性上呼吸道感染90%以上是由病毒引起[1].其发病率高、传播快、对人类健康危害大,人均年发病5～6次,与慢性支气管炎、哮喘加重有关,多发生于冬季.呼吸道病毒习惯上是指侵犯呼吸道的病毒,至少涉及8个科,200多个型别的病。

目的 建立一种从患腹泻婴幼儿粪便标本中腺病毒的方法.方法 设计出可同时鉴定腺病毒并判断是否属于F组(肠道腺病毒Ad40或Ad41)的2组引物,通过PCR检测50份腹泻患儿粪便标本,对鉴定为阳性标本的扩增产物进行测序,以验证腺病毒型别.同时用抗原检测的方法鉴定粪便标本中的腺病毒,并以此为金标准,评价PCR方法检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确性.结果 腺病毒阳性的粪便标本通过PCR扩增可得到大小为301 bp的片段,如果属F组型别则还可同时扩增得到1条541 bp(Ad40)或586 bp(Ad41)的片段.PCR检测的50份粪便标本中有15份为腺病毒阳性,阳性率为30%其中8份属腺病毒F组.15份腺病毒阳性标本的PCR扩增产物经测序比对均属腺病毒,其中13份为F型别,2份为腺病毒7型.以测序结果为金标准,PCR检测F组腺病毒方法的特异度为100%,敏感度为61.6%,阳性预测值为100%,阴性预测值为71.4%,准确性为67.0%.与腺病毒抗原检测法(阳性率为22%)比较,PCR检测腺病毒的敏感度为45.5%,特异度为74.4%,阳性预测值为33.3%,阴性预测值为82.9%,准确性为68.0%.结论 成功建立PCR法可一次快速检出患儿粪便标本中的腺病毒,并区分F组和非F组型别,有望用于开展常规粪便标本腺病毒检测,并为肠道腺病毒流行病学的研究提供参考。

目的 建立一种可以同时检测8种常见呼吸道病毒的多重RT-PCR检测方法.方法 通过查阅文献,对流感病毒A、B和C型、呼吸道合胞病毒、鼻病毒、冠状病毒229E、OCA3和人偏肺病毒8种呼吸道RNA病毒RT-PCR检测结果中敏感度和特异度高的引物进行评估,通过实验最终挑选出8对半巢式PCR引物并平均分成2组.每组8条特异性引物在同一个体系中进行一步法反转录扩增和半巢氏扩增,用本室保存的病毒株进行方法的建立,并从医院门诊采集到261份有上呼吸道症状的患者标本对已建立的多重RT-PCR体系进行初步评估.结果 8种呼吸道病毒分别在2组多重RT-PCR体系中被成功扩增,评估结果显示呼吸道合胞病毒、鼻病毒和冠状病毒229E第一轮多重RT-PCR与普通RT-PCR结果的一致性分别为97.9%、95.8%和95.8%;第二轮多重半巢氏PCR与普通PCR扩增结果一致性分别为48/48、47/48和48/48;其他5种病毒的2轮扩增的结果一致性均为100%.结论 2组多重RT-PCR与普通RT-PCR扩增结果均具有较高的一致性,一种可以同时检测8种常见呼吸道病毒的多重RT-PCR检测方法被初步构建。

目的 建立检测人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的多重巢式PCR(nPCR)和多重逆转录PCR(RT-PCR)方法.方法 针对HIV-1的gag、pol和gp41区设计3套引物,分别建立检测HIV DNA的多重nPCR和检测HIV RNA的多重RT-PCR方法;以建立的PCR方法对150例HIV抗体阳性患者及50例阴性患者进行检测,以ELISA/免疫印迹实验(Westen blot,WB)相结合的抗体检测结果(ELISA/WB)为金标准,计算所建立的PCR方法的检测敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确性、可重复性;分别用建立的多重nPCR和多重RT-PCR检测73份阳性标本,并与HIV-1核酸序列扩增技术(NASBA法)进行检测敏感度的比较;对43份检测阳性的DNA标本进行亚型鉴定.结果 多重nPCR的检测敏感度为98.0%(147/150),多重RT-PCR的敏感度为91.3%(137/150),2种方法的特异度均为100%(50/50),多重nPCR和多重RT-PCR的阳性预测值分别为98.0%(147/150)和91.3%(137/150),阴性预测值均为100%(50/50),准确性分别为98.5%和93.5%.可重复性分别为96.7%(87/90)和93.3%(84/90);多重nPCR的检测敏感度(97.3%)高于NASBA法(72.6%),差异有统计学意义(χ2=17.34,P<0.01),多重RT-PCR的检测敏感度(79.5%)与NASBA法相比,差异无统计学意义(χ2=0.94,P=0.332);检测的43份HIV DNA阳性标本分别为37份B'亚型、5份AE亚型和1份Bc亚型.结论 成功地建立了多重nPCR和多重RT-PCR方法,操作简便、价格低廉,具有较高的敏感度和特异度和可重复性,能覆盖我国最主要的流行病毒株。

目的 分析了解深圳地区秋冬季婴幼儿腹泻标本中轮状病毒、诺如病毒、星状病毒,肠道腺病毒4种主要急性胃肠炎病毒的感染情况.方法 收集深圳地区多家医院2007年10月-2008年2月腹泻患儿粪便标本192份,分别采用ELISA检测4种病毒抗原及采用PCR技术检测病毒核酸,阳性标本的PCR产物经纯化、测序加以验证,并比较2种方法应用效果.结果 EHSA和PCR从192份标本共检出病毒156例,检出率为81.3%(156/192),4种病毒的阳性率分别为轮状病毒62.0%(119/192),诺如病毒17.7%(34/192),肠道腺病毒16.7%(32/192),星状病毒3.1%(6/192),其中混合感染率为16.7%(32/192);ELISA技术和PCR技术对4种病毒的检出率分别为轮状病毒52.6%和50.5%(χ2=0.4,P>0.05),诺如病毒8.3%和12.0%(χ2=1.24,P均>0.05),肠道腺病毒7.3%和11.5%(χ2=1.75,P>0.05),星状病毒1.6%和2.1%(χ2=0,P>0.05),2种方法检出率的差异无统计学意义(χ2值分别为0.4、1.24、1.75及0,P均>0.05);2种方法对轮状病毒的检测具有较好的一致性(Kappa值为0.58),对诺如病毒、肠道腺病毒和星状病毒的检测一致性较差(Kappa值分别为0.18、0.15和0.27).结论 轮状病毒仍是深圳地区婴幼儿秋冬季腹泻的最主要病原,其次为诺如病毒和肠道腺病毒,病毒混合感染比例较大.ELLSA与PCR技术在对诺如病毒、肠道腺病毒和星状病毒的检测上具有互补性,联合应用可提高诊断率。

呼吸道感染是临床常见病症,可由多种病原体引起.目前已证明,急性呼吸道感染90%以上是非细菌性的,其中大都分由病毒引起,许多病毒具有感染力强、传播快、潜伏期短、发病急、病后免疫力不能持久等特点,常导致较高的发病率和死亡率,造成疾病的大流行[1].由于临床诊治呼吸系统疾病的盲目性较大,非细菌性呼吸系统疾病滥用抗生素的现象普遍。

国内外研究表明HBV基因型与病毒的感染途径、基因突变、疾病进程、抗病毒药物疗效有一定的关系[1-3]引,了解HBV基因型分布,追溯感染源对判断预后、监测抗病毒用药疗效、选择个体化治疗方案等具有重要应用价值.目前根据全基因序列同源性>92%或S区基因序列同源性≥96%,HBV分为A～H 8个基因型,在亚洲主要是A～F[4],国内主要基因型为B和C型。

在医学论文中正确、合理使用专业名词缩略语可以达到精简文字、节省篇幅，使文章读起来更精练易懂的目的。现将检验医学专业领域为大家所熟知的专业名词及专业机构缩略语公布如下（按英文首字母顺序排列），本刊在论文中将不再注释其中文。

为顺应当今期刊网络化、数字化的发展趋势，更好地为广大作者、读者提供高质量的服务，本刊从2009年5月15日起已开通中华检验医学杂志网站及稿件远程管理系统。网站的开通，将为广大读者、作者、编者提供一个学术交流和沟通的平台。

近年来许多报道国内优秀科研成果的论文首先投向国外，特别是被美国科学引文索引（SCI）收录的高水平国际期刊上，有助于促进国际间的学术交流，让世界更好地了解中国。为了将这些高质量、有影响的论文介绍给国内的广大读者，《中华检验医学杂志》将开设“在国外发表的中国论文介绍”栏目，目的是使国内更多的读者共享我国的科研成果和相关学科的进展。

1．统计研究设计：应交代统计研究设计的名称和主要做法。如调查设计（分为前瞻性、回顾性或横断面调查研究）；实验设计（应交代具体的设计类型，如自身配对设计、成组设计、交叉设计、析因设计、正交设计等）；临床试验设计（应交代属于第几期临床试验，采用了何种盲法措施等）。

我国著作权法公布以来，已得到社会各界的广泛重视，作为医学科技期刊必须不折小扣地执行著作权法。为此将本刊对作者署名和志谢的有关要求重申如下。

在医学论文的描述中，凡涉及到实验动物者，在描述中应符合以下要求：（1）品种、品系描述清楚；（2）强调来源；（3）遗传背景；（4）微生物学质量；（5）明确体重；（6）明确等级；（7）明确饲养环境和实验环境；（8）明确性别；（9）有无质量合格证；