抗CCP抗体、抗角蛋白抗体及类风湿因子联合检测在类风湿关节炎诊断中的应用张园 张吟眉 崔丽艳 杨硕 张捷
中华检验医学杂志2014年 37卷 08期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2014.08.007
目的评价抗环瓜氨酸多肽抗体(anti-CCP)、类风湿因子(RF)、抗角蛋白抗体(AKA)的单一及联合检测在类风湿关节炎(RA)诊断中的应用价值。方法前瞻性研究。随机表法选取2011年1月至2013年9月于北京大学第三医院就诊的门诊及住院的137例RA患者,265例非RA的自身免疫患者,111名健康人,检测血清中AKA、anti-CCP抗体及RF的水平。其中AKA测定采用间接免疫荧光法;RF测定采用速率散射比浊法;anti-CCP测定采用电化学发光法。检测方案分为单项目、双项目、三项目检测,一共18种方案。检测结果组间比较采用四格表卡方(χ2)检验。结果Anti-CCP检测的准确度(80.39%),YI(0.51),和κ值(0.55)在单项目检测方案中均最高。方案anti-CCP+(AKA/RF) ,AKA/(anti-CCP+RF), 和(AKA+RF)/(anti-CCP+RF)/(AKA+anti-CCP)的准确度(80.94,80.94,80.66),YI(0.51,0.51,0.50),和κ值(0.55,0.56,0.54)在联合检测方案中最高。结论Anti-CCP检测在辅助RA诊断中具有突出的价值。联合检测方案anti-CCP+(AKA/RF)、AKA/(anti-CCP+RF)、与(AKA+RF)/(anti-CCP+RF)/(AKA+anti-CCP)对于RA的诊断最有价值。(中华检验医学杂志,2014,37: 582-586)
系统性红斑狼疮患者抗核抗体谱聚类分析初探陆晓东 单小云 赵硕 杜红卫 薛亚东
中华检验医学杂志2014年 37卷 08期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2014.08.008
目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者血清抗原特异性抗核抗体的聚类现象与SLE临床特征的相关性。方法对2010年3月至2012年5月在金华市中心医院风湿科入院的113例SLE确诊患者的抗核抗体(ANA)检测结果和临床资料进行回顾性分析。基于间接免疫荧光法(IIF)测定的ANA,以及线性免疫分析法(LIA)测定的15种抗原特异性抗核抗体检测结果,使用系统聚类方法分析全部病例抗核抗体谱的聚类现象,卡方检验分析不同抗体聚类与SLE临床表现的相关性。结果IIF和LIA检测抗核抗体在SLE患者中的阳性率均为97.3%,2种方法的总体符合率为98.2%。SLE患者中共检出13种抗原特异性抗核抗体,对这一抗核抗体谱的聚类分析显示SLE患者呈现3种聚类特征,即Nuc/His/dsDNA聚类(C1)、low-Ro/low-La聚类(C2)和Ro/Sm/RNP聚类(C3),3种聚类患者分别占总病例数的36.3%、24.8%和38.9%。对不同聚类患者的免疫学指标、临床表现、并发症的分析显示,3种聚类患者的天冬氨酸转氨酶(AST)水平差异有统计学意义[C1、C2、C3分别为(32.62±21.92)、(25.56±16.63)、(50.41±60.86)U/L]。3种聚类患者入院时均表现出较高的慢性皮肤型狼疮、肾脏病变、关节炎等发生率。其中,慢性皮肤型狼疮和白细胞减少症在3种聚类患者中的发生率分别为39.0%、39.3%、63.6% 和56.1%、25.0%、56.8%,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。Ro/Sm/RNP聚类患者的慢性皮肤型狼疮发生率较其他2种聚类患者显著升高(P均<0.05),且狼疮肾炎的并发症发生率(43.2%/26.8%和39.3%)较高;而low-Ro/low-La聚类患者的白细胞减少症发生率较其他2种聚类患者显著降低(P<0.05),并发高血压/肺动脉高压的风险也较低(7.1%/19.5%和22.7%);Nuc/His/dsDNA聚类患者多发血小板减少症(41.5%/21.4%和25.0%),但少见神经性症状(0%/3.6%和11.4%),同时肺部/上呼吸道感染的并发症发生率较高(46.3%/28.6%和29.5%)。结论SLE患者血清抗核抗体谱存在聚类特征,且不同的抗体聚类特征与SLE临床表现和并发症存在一定的相关性。(中华检验医学杂志,2014,37:587-592)
血清IgG4检测在IgG4相关性疾病诊断中的临床意义李萍 陈华 吴庆军 吴子燕 张蜀澜 张文 张奉春 李永哲
中华检验医学杂志2014年 37卷 08期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2014.08.009
目的评估血清IgG4检测对诊断IgG4相关性疾病(IgG4-RD)的临床意义。方法回顾性研究2011年2月至2013年3月首次在北京协和医院就诊的成年人IgG4-RD患者160例,均有详细的临床资料和最终明确诊断,同时选取126例患者为其他非血清IgG4相关的免疫性疾病对照组,125名来自北京协和医院体检中心的健康体检者作为健康对照组。采用散射比浊法测定血清IgG4,160例患者的血清IgG4结果以首次就诊时检测结果为准。所有数据采用SPSS13.0统计学软件进行统计分析。结果160例IgG4-RD患者中132例患者血清IgG4高于目前国际上制定的血清IgG4最高参考上限1 350 mg/L,占其总数的82.5%。疾病对照组中有26例血清IgG4水平升高,占其总数的20.6%。IgG4-RD组血清IgG4高于疾病对照组和健康对照组,差异均有统计学意义(χ2=110.8、158.6,P均<0.05)。而疾病对照组和健康对照组进行统计分析,差异无统计学意义(χ2=1.964,P>0.05)。通过IgG4-RD组和对照组绘制ROC曲线,计算区分IgG4-RD组和对照组最佳诊断界限值为1575 mg/L。结论用于诊断中国IgG4-RD的血清IgG4最佳诊断界限值不同于目前国际上通用的标准,建立中国人的参考区间具有重要意义。(中华检验医学杂志,2014,37:593-596)
不同亚型抗磷脂抗体在系统性红斑狼疮诊断中的价值张蜀澜 吴子燕 陈思 李媛 张文 李永哲
中华检验医学杂志2014年 37卷 08期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2014.08.010
目的探讨不同亚型(IgG、IgM和IgA型)抗心磷脂抗体(aCL)和抗β2糖蛋白1抗体(抗β2GP1抗体),以及狼疮抗凝物(LA)在系统性红斑狼疮(SLE)诊断中的价值。方法病例对照研究。2012年1月至2013年9月在北京协和医院风湿免疫科确诊为SLE的患者共100例(其中42例确诊为继发性抗磷脂综合征,SAPS),44名健康对照者和32例除外SLE和抗磷脂抗体综合征(APS)的其他结缔组织病患者采用酶联免疫吸附法(ELISA)分别用IgA/G/M多亚型筛选试剂和IgA、IgG、IgM单亚型试剂检测aCL和抗β2GP1抗体,采用改良的稀释蝰蛇毒磷脂时间 (dRVVT) 检测狼疮抗凝物(LA),并回顾分析SLE患者中抗磷脂抗体与APS临床表现的相关性。采用χ2检验比较SLE组、健康对照组及其他结缔组织疾病组中抗磷脂抗体的阳性率,不同组间抗体浓度分布的比较采用独立样本Kruskal-Wallis检验。抗磷脂抗体与APS临床表现的相关性采用Spearman相关分析。在SLE组患者中,以APS的临床诊断作为金标准,采用四格表统计抗磷脂抗体对APS的诊断效能。结果SLE组中IgG型aCL(χ2=15.031,P<0.001),IgA/G/M型(χ2=11.678,P=0.003)和IgA型(χ2=6.17,P=0.036)抗β2GP1抗体的阳性率高于健康对照组和疾病对照组,差异有统计学意义。IgA/G/M型(r=0.207,P=0.039),IgG(r=0.230,P=0.021)和IgA型(r=0.217,P=0.030)aCL,IgA/G/M型(r=0.218,P=0.029)和IgA型(r=0.255,P=0.01)抗β2GP1抗体,及LA(r=0.233,P=0.02)与血栓事件相关。IgA/G/M型抗β2GP1抗体(r=0.22,P=0.029)和LA(r=0.254,P=0.011)与病态妊娠相关。aCL阳性的SLE患者中,23.1%(6/26)仅IgM和/或IgA亚型阳性;抗β2GP1抗体阳性的SLE患者中,53.6%(15/28)仅IgM和/或IgA亚型阳性。在SLE患者中,IgA/G/M型aCL对APS的特异度和敏感度分别为98.3%和26.2%,IgA/G/M型抗β2GP1抗体对APS的特异度和敏感度分别为84.5%和40.5%。当2种以上抗体亚型阳性时,aCL和抗β2GP1抗体对APS的特异度高于仅检测IgG型aCL(98.3%/94.8%)和抗β2GP1抗体(98.3%/93.1%)。当任意一项亚型项阳性时,aCL和抗β2GP1抗体对APS的敏感度高于仅检测IgG型aCL(47.6%/40.5%)和抗β2GP1抗体(42.9%/21.4%)。结论IgA/G/M多克隆试剂筛查aCL对于APS的敏感度较低,建议初筛时应同时检测IgG型和IgM型aCL。多克隆IgA/G/M型抗β2GP1抗体对于APS的敏感度较高,并与血栓和病态妊娠显著相关,建议采用IgA/G/M多亚型抗β2GP1抗体作为初筛,初筛阳性患者再进一步确认抗体亚型。IgA型抗磷脂抗体与血栓事件相关,在IgG和IgM型抗体阴性时检测IgA型抗体有助于APS疑似患者的诊断。(中华检验医学杂志,2014,37:597-602)
抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体检测对类风湿关节炎诊断的Meta分析颜海希 蔡林灵 金高兵 李俊
中华检验医学杂志2014年 37卷 08期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2014.08.011
目的评价血清抗突变型瓜氨酸波形蛋白(MCV)抗体检测对类风湿关节炎(RA)的诊断价值。方法Meta分析。检索1990年1月至2013年1月美国国立医学图书馆数据库网上检索系统(PubMed)、荷兰医学文摘数据库(Embase)和中国知网期刊数据库(CNKI)等数据库有关抗MCV抗体检测诊断RA的文献。采用Meta-Disc1.4对纳入研究进行综合定量评价,分析异质性来源及绘制综合受试者工作曲线(SROC)。应用Stata11软件,采用Begg′s检验识别发表偏倚。结果共纳入27篇研究,合并分析的敏感度、特异度分别是0.74(0.73~0.76)、0.83(0.82~0.85),SROC曲线下面积(AUC)是0.896。其中23篇同时检测抗MCV抗体和抗环瓜氨酸(CCP)抗体的研究进行合并AUC分析,抗MCV抗体、抗CCP抗体检测诊断类风湿关节炎的AUC分别为0.887和0.924,两者差异无统计学意义(Z=1.525, P=0.064)。结论抗MCV抗体对于RA的诊断具有较高的敏感度与特异度,但与抗CCP抗体相比,对RA的诊断效能差异无统计学意义。(中华检验医学杂志,2014,37:603-607)
原发性胆汁性肝硬化血浆microRNA表达谱的初步分析梁冬雨 高得勇 娄晓丽 侯彦强
中华检验医学杂志2014年 37卷 08期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2014.08.012
目的探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者血浆微小RNA(miRNA)的表达及临床意义。方法采用随机对照研究的方法,收集上海松江中心医院2010年12月至2013年1月就诊的19例PBC患者的血浆,同时收集了性别年龄与PBC患者相匹配的10名健康体检者和10例病毒性肝炎患者的血浆,从中选取3例PBC患者和3名健康体检者,应用芯片技术进行miRNA表达谱筛选。针对筛选出有表达差异的miRNA,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术对收集的3组标本进行验证,统计学分析和绘制受试者工作曲线(ROC)评估差异miRNA的临床价值。结果芯片结果显示PBC组与对照组共有16个差异表达miRNA。qRT-PCR验证发现,与正常组相比,PBC组miRNA-572和miRNA-575表达明显上调(P<0.05),miRNA-92a-3p和miRNA-4516表达明显下调(P<0.05)。而与非PBC肝硬化组相比,PBC组miRNA-92a-3p和miRNA-4516表达下调(P<0.05)。miRNA-92a-3p在评价PBC组和健康对照组的曲线下面积(AUC)为0.92(0.86~1.00),当最佳临界值为1.26,敏感度92%,特异度80%。miRNA-4516在评价PBC组和健康对照组的曲线下面积为0.89(0.75~1.00),当最佳临界值为1.16,敏感度85%,特异度70%。miRNA-92a-3p和miRNA-4516在鉴别诊断PBC和非PBC肝硬化时曲线下面积分别为0.84 (0.68~0.99)和0.76(0.57~0.96)。当miRNA-92a-3p取最佳临界值为1.08,敏感度89%,特异度81%。当miRNA-4516取最佳临界值为1.06,敏感度77%,特异度68%。结论PBC患者血浆中特异表达的miRNA对 PBC诊断及鉴别诊断的具有潜在临床应用价值。(中华检验医学杂志,2014,37:608-612)
三种四代HIV筛查试剂检测窗口期的差异研究吉阳涛 韩晓旭 欧阳金鸣 王亚男 尚红
中华检验医学杂志2014年 37卷 08期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2014.08.013
目的比较3 种不同技术原理的第四代HIV筛查试剂诊断HIV感染检测窗口期的差异。方法采用第四代电化学发光法(ECLIA)、化学发光法(CLIA)及酶联免疫法(ELISA)3种不同技术原理的HIV抗原抗体联合检测试剂,对2009至2011年本实验室男男同性恋高危人群队列发现的急性HIV感染者26例的37份血浆样本及购买的国际HIV感染阳转血清盘22份样本进行检测,比较3种试剂检测HIV感染的窗口期长短及敏感度。3种试剂检测HIV早期感染敏感度比较使用卡方检验进行统计学分析。结果3种试剂检测窗口期长短不同。对国际HIV感染阳转血清盘22份样本,ECLIA和CLIA试剂检测结果一致,窗口期比ELISA试剂估计缩短至少1~5 d。对本室收集的急性HIV感染37份样本,ECLIA和CLIA试剂全部检出,ELISA试剂结果一致率为94.6%。3种试剂对HIV感染阳转前样本检测敏感度差异有统计学意义,ECLIA和CLIA试剂敏感度相同(93.5%),高于ELISA试剂敏感度(71.0%)(χ2=5.14, P<0.05)。结论3种不同技术原理四代筛查试剂对HIV早期感染检测窗口期及敏感度存在差异,ECLIA试剂和CLIA试剂间无差异,优于ELISA试剂。(中华检验医学杂志,2014,37:613-616)
同位素稀释超高效液相色谱串联质谱法快速测定血清25-羟维生素D2和25-羟维生素D3临床方法的建立禹松林 韩建华 张江涛 张殿喜 陈雨 程倩 苏薇 邱玲
中华检验医学杂志2014年 37卷 08期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2014.08.014
目的建立同位素稀释超高效液相色谱串联质谱(ID-UPLC/MS/MS)方法测定血清25羟维生素D2[25(OH)D2]和25羟维生素D3[25(OH)D3],以用于常规临床实验室评价维生素D含量。方法方法学建立及评价。2013年5月至8月征集的500名北京健康志愿者,采集血清用于建立参考区间。以稳定同位素标记的25(OH)D2-D3和25(OH)D3-D3作内标,首先用硫酸锌溶液和甲醇溶液沉淀血清蛋白、正己烷震荡提取、离心后吸取上清液、氮气挥干,再用流动相重组,应用ID-UPLC/MS/MS技术分析;质谱采用正离子电喷雾离子化的多离子反应监测模式,25(OH)D2和25(OH)D3定量离子通道选择质荷比(m/z)分别为413.3→395.3和401.4→383.4;内标25(OH)D2-D3和25(OH)D3-D3离子通道m/z分别为416.3→398.3和404.4→386.4。以标准品制作标准曲线,结合稳定同位素内标法定量,建立ID-UPLC/MS/MS法快速测定25(OH)D2和25(OH)D3的方法。用含4个水平25(OH)D3的混合人血和3个水平25(OH)D2和25(OH)D3的质控品进行3次重复分析,每次每种样本重复分析3份,以考察方法的精密度,同时评价血清样本添加不同浓度标准品的加样回收率。初步建立北京人群血清25(OH)D参考范围,亚组间差异采用独立样本t检验。结果用ID-UPLC/MS/MS法在本实验条件下可同时快速检测血清25(OH)D2和25(OH)D3,分析时间仅4.5min,特异性高,未见明显干扰因素。25(OH)D2[或25(OH)D3]/内标峰面积比与对应的浓度线性相关系数>0.999,25(OH)D2批内和总变异分别为1.89%~4.19%和2.58%~7.90%,25(OH)D3批内和总变异分别为1.51%~2.86%和1.89%~3.26%。25(OH)D2和25(OH)D3三次试验的加样回收率范围为98.12%~103.11%和98.00%~103.40%。 25(OH)D2和25(OH)D3检测限(LOD)均为0.39 ng/ml,定量限(LOQ)分别为1.25 ng/ml和1 ng /ml,具有较高的灵敏度。结论本研究成功建立了ID-UPLC/MS/MS同时测定血清25(OH)D2和25(OH)D3的方法,该法可应用于常规临床实验室评价维生素D含量。(中华检验医学杂志,2014,37:617-622)
流式细胞术检测中性粒细胞膜碱性磷酸酶方法的建立张欢欢 张春燕 杨晋 郑萍 赵绍林 吴惠毅
中华检验医学杂志2014年 37卷 08期
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2014.08.015
目的建立流式细胞术检测中性粒细胞膜碱性磷酸酶(mNAP)表达。 方法方法学建立。采集研究对象乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝静脉血,应用PE标记抗碱性磷酸酶单克隆抗体,建立流式细胞术检测外周血mNAP表达方法。运用BD公司QuantiBRITETM PE于流式细胞术评估每个细胞结合的抗体数(AB/c),间接反映待测细胞mNAP的表达量。观察肝素、乙二胺四乙酸二钾、柠檬酸钠3种抗凝剂、标本放置温度、时间以及血浆中碱性磷酸酶对结果的影响,评价方法精密度。用所建方法检测481名健康人群外周血mNAP表达水平,对数据进行正态性检验,确立临床参考区间。检测84例重症感染和局部感染患者和39例病毒感染患者外周血mNAP表达水平。结果标本检测前,应用磷酸盐缓冲液洗涤可以有效消除血浆中碱性磷酸酶(ALP)干扰。3种不同抗凝剂采集的标本对mNAP检测结果无影响。标本放置室温或4 ℃ 12 h内对检测结果无影响。精密度实验结果,批内变异系数(CV)2.01%~3.33%,平均CV 2.67%;批间CV 5.80%~6.00%,平均CV 5.90%。健康成年人无论男女,mNAP表达水平均呈非正态分布。男、女中位数(P25,P75)分别为1 758(1 378~2 310) AB/c、1 897(1 369~3 249)AB/c,性别之间差异无统计学意义(U=27 140,P=0.243 8)。以2.5%~97.5%位数作为临床参考区间,结果为920.5~3 493.0 AB/c。细菌感染患者外周血中mNAP表达水平13 532(9 756~16 869)AB/c高于病毒感染患者1 143(536~2 012)AB/c以及健康对照人群1 879(1 399~2 497)AB/c(H=221.5, P<0.01)。结论应用QuantiBRITETM PE试剂盒来标准化流式细胞仪的设置,可定量分析待测样品荧光强度,进而获得细胞所含荧光素分子数,并计算出每个细胞表达的抗原位点或抗原分子数目,从而达到定量检测的目的。应用流式细胞术检测外周血中mNAP,操作简便、快速、结果准确,mNAP表达对于鉴别细菌、病毒感染具有重要的临床价值。(中华检验医学杂志,2014,37:623-627)