2008年 · 第88卷第37期

分子生物学知识与技术的普及和应用,推动了现代医学的快速发展,特别是给临床带来了日新月异的变化.近5年分子生物学理论及技术已进入了临床诊断和治疗的主流医学.充分利用分子生物学和数字化信息科学的理论和手段,研究人类疾病的发病机制、诊断及防治手段,正在形成现代医学研究的重要领域--分子医学(molecular medicine).国际上已有科学家预测:未来医学是分子医学.基因治疗及其他分子治疗走在了前沿[1]。

目的 通过候选基因PAX1上单核苷酸多态性(SNP)位点的筛查,探索PAX1与中国汉族人群先天性脊柱测凸(CS)及其不同临床表型之间的关联.方法 采用病例-对照研究,127例中国汉族CS患者;127例对照为性别、年龄、民族与病例相匹配的非脊柱侧凸患者.用QIAamp DNABlood Mini Kit法提取外周血样本的全基因组DNA,根据国际人类基因组单体型图计划提供的基因型数据,应用Haploview 4.0软件选取PAX1的标签SNPs.根据椎体畸形特点、畸形部位、畸形受累程度、有无合并肋骨畸形和椎管内畸形将病例组进一步分为不同临床表型.对所有样本应用SNPstreamUHT Genotyping系统对所选SNP位点进行基因型鉴定;进一步进行基于基因型/等位基因频率的关联分析,并用Haploview 4.0软件分析对照组SNP位点间是否存在连锁不平衡.结果 共筛选SNP1(rs17861031)和SNP2(rs6047590)两个位点,其基因型分布在病例和对照组中均符合Hardy-Weinberg平衡.两位点间不存在连锁不平衡.病例/对照组中等位基因频率分别为:SNP1A=37(15%)/37(15%)、SNP1G=217(85%)/217(85%),SNP2A=28(11%)/25(10%)、SNP2T=226(89%)/229(90%);基因型频率分别为:SNP1AA=2(2%)/2(2%)、SNP1AG=33(26%)/33(26%)、SNP1GG=92(72%)/92(72%),SNP2AA=2(2%)/2(2%)、SNP2AT=24(19%)/21(17)、SNP2TT=101(80%)/104(82%),差异均无统计学意义(P>0.05).在进一步与CS临床表型的关联分析中没有发现阳性位点.结论 在中国汉族人群中,PAX1基因可能不是引起CS及其不同临床表型的主要因素。

目的 研究应用RNAi(RNA interference)技术靶向PPARγ基因对酒精诱导下人类骨髓基质细胞(hBMSCs)成骨分化的促进作用及对其成脂分化的抑制作用.方法 分离培养hBMSCs,经传代后应用脂质体包裹后的PPARγ-siRNA在体外转染hBMSC,然后在酒精诱导成脂分化的条件下培养转染后的细胞,应用组织学和分之生物学的方法观测细胞成脂-成骨分化情况并进行定量分析.结果 组织学染色及定量显示,在酒精诱导成脂条件下,PPARγ-siRNA转染组的脂肪细胞形成率明显低于酒精成脂诱导组(P=0.002);而干扰组的钙结节行成率明显高于酒精成脂诱导组(P=0.000).分之生物学检测结果显示,PPARγ-siRNA可明显从mRNA和蛋白水平上调hBMSCs成骨定向分化的特异性转录因子(Osf2/Cbfal)、成骨分化过程中的早期标志Ⅰ型胶原的表达和合成,并通过促进碱性磷酸酶和骨钙素的蛋白合成促进成骨分化.结论 应用siRNA干扰技术靶向PPARγ基因可有效促进酒精作用下的人骨髓基质干细胞向成骨细胞分化,并且能抑制其向脂肪细胞分化.siRNA可为酒精性骨质疏松的基因治疗和分子机制的研究提供新策略。

目的 建立大鼠腰椎终板软骨细胞体外自然退变模型,并探讨Sox9基因在终板软骨细胞自然退变中的变化及作用.方法 取大鼠腰椎终板软骨细胞,酶消化及自然传代法分离培养大鼠终板软骨细胞,建立体外终板软骨细胞培养模型.采取绘制细胞生长曲线、HE、甲苯胺蓝染色及免疫组织化学染色等方法,对该模型进行鉴定.RT-PCR检测各代细胞中Sox9、Ⅱ型胶原mRNA的表达变化.结果 大鼠终板软骨细胞表达特征性Ⅱ型胶原,其生长情况及细胞表型类似于关节软骨,细胞传至4、5代后表现出细胞形态呈梭形、细胞增殖速度减慢等退变的特征.与原代相比,Sex9基因mRNA在4、5代终板软骨细胞的表达明显下降(P<0.05),受其调控的Ⅱ型胶原mRNA的表达也相应降低,两者表达变化呈正相关(r=0.912,P<0.05).结论 终板软骨细胞自然退变模型成功建立,为椎间盘退变机制研究提供了较好的细胞学基础.Sox9基因与终板软骨细胞自然退变存在明显关联,Sox9基因的表达下降可抑制软骨终板细胞的增殖及基质合成,从而促进或诱发椎间盘的退变。

目的 评价老年患者股骨粗隆骨折手术应用腰丛阻滞和硬膜外阻滞的麻醉效果、血流动力学变化和肛门排气、膀胱功能恢复情况.方法 行单侧股骨粗隆手术的老年患者60例,年龄65～97岁.随机分成腰丛组和硬膜外组(n=30).分别采用患侧后路腰丛阻滞和腰1～2间隙的硬膜外阻滞.观察阻滞起效时间、麻醉效果、术中输液量、麻醉后1 h的血压、心率变化和麻醉恢复情况.结果 股神经、股外侧皮神经、隐神经和闭孔神经阻滞的起效时间腰丛组为(2.7±2.0)min、(3.1±3.4)min、(3.7±3.1)min和(3.5±3.3)min,硬膜外组为(13.5±2.1)min、(13.5±2.1)min、(13.5±2.1)min和(13.5±2.1)min,腰丛组均快于硬膜外组(均P<0.01);腰丛组的术后镇痛时间显著长于硬膜外组[(420±152)min vs(204±44)min](P<0.01).硬膜外组阻滞后10～60min的血压均低于麻醉前(均P<0.01).腰丛组输液量显著少于硬膜外组[(773±353)ml vs(1483±444)ml](P<0.01),肛门排气时间显著短于硬膜外组(1.1±0.6 h vs 5.9±1.2 h)(P<0.01),硬膜外组发生尿潴留需留置导尿患者显著多于腰丛组(8例 vs 0例)(P<0.01).二组麻醉效果优良率均为100%,腰丛组优秀20例,良好10例;硬膜外组优秀28例,良好2例,硬膜外组优秀率显著高于腰丛组(P<0.05).结论 老年患者股骨粗隆骨折手术可以选择腰丛阻滞或硬膜外麻醉,硬膜外阻滞麻醉效果优秀率更高,但腰丛阻滞术后消化系统、泌尿系统功能恢复更快。

目的 了解北京住院脑梗死/短暂性脑缺血发作(TIA)患者对于住院期间及出院90 d二级预防药物及行为修正的依从性现状.方法 调查2006年10月1日至2007年5月1日参加研究医院的符合入组标准的连续住院脑梗死及TIA患者对于肾素-血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)/血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)、他汀药物、抗血小板药物治疗的使用率,戒烟、控制体重等行为修正率并随访90 d.结果 入组患者中使用抗血小板及他汀等药物及行为修正率偏低,并且在出院90 d这一比例进一步降低.结论 医生应关注患者有明确循证医学依据的二级预防药物及行为修正的依从性,并采取行之有效的措施提高患者药物治疗及行为修正的依从性。

目的 探讨帕金森病痴呆(PDD)患者的18F-脱氧葡萄糖正电子发射体层(18F-FDGPET)脑显像特点及意义.方法 对20例PDD患者、8例非痴呆PD患者和30名相匹配的健康对照进行18F-FDG PET脑显像,应用视觉分析法和统计参数图(SPM)分析法比较病例组与对照组大脑葡萄糖代谢差异.结果 与对照组相比,视觉分析法显示非痴呆PD患者示踪剂分布均匀对称,PDD患者双侧额叶、颞叶、顶叶、枕叶及基底节、丘脑葡萄糖代谢减低;在一定显著性水平(P<0.001)和像素阈值(K=100像素)下,SPM分析显示非痴呆PD患者仅双侧顶叶后部代谢减低;PDD患者局部脑葡萄糖代谢率(rCMRglc)减低的脑区包括双侧顶上小叶、顶下小叶、额上回、额中回、颞中回、楔叶、扣带回、枕叶舌回、额叶内侧部及壳核、丘脑等部位.根据幻觉及记忆损害程度将PDD分为幻觉(HD)组和记忆障碍(MD)组,2组MMSE及Hoehn-Yahr分级差异无统计学意义(P>0.05),而HD组的年龄与病程明显低于MD组(P<0.05),应用SPM分析法与正常对照进行比较,发现HD组顶枕叶代谢减低尤为显著而类似于路易体痴呆,而MD组颞顶联合区皮质、楔前叶糖代谢明显减低,与阿尔茨海默病的代谢特点一致.结论 18F-FDG PET脑显像有助于PDD的诊断及发病机制的阐述。

目的 探讨术前放化疗、放疗及单纯手术对中低位直肠癌患者细胞免疫功能的影响.方法 90例中低位直肠癌患者非随机同期分为术前放疗组、术前放化疗组、单纯手术组(对照组)3组,每组各有30例患者.术前放疗组采用常规分割放疗,三野照射总剂量30 Gy,照射次数10次,约2周.术前放化疗组的化疗采用口服卡培他滨的单药方案,每日1000 mg/m2,连用2周,休息1周,共2个疗程;放疗选择在口服化疗药两天后进行,方法同单纯放疗组.单纯手术组术前不接受放化疗.放化疗组和放疗组患者均于相关治疗结束3周后手术.分别于入院当天、手术前1 d、术后7 d及术后1个月抽取患者外周血,采用流式细胞术检测患者外周血中T细胞亚群百分率(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)及NK细胞含量变化.结果 放疗前后,术前放疗组和术前放化疗组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK细胞水平差异无统计学意义(P>0.05);3组患者手术后1周CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK细胞水平均明显降低,CD8+升高(P<0.05),术后1个月CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK细胞含量均明显升高,CD8+明显降低(P<0.05),但各组间在不同治疗时段内细胞免疫差异无统计学意义(P>0.05).结论 术前放化疗作为一种中低位直肠癌新的有效治疗方法,对患者的细胞免疫功能无明显影响。

目的 探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)与早发型子痫前期发病的关系.方法 比较60名正常孕妇和同孕周30例早发型及30例晚发型子痫前期患者胎盘中LOX-1和凋亡相关基因表达的时空变化;以免疫组化、RT-PCR和Western印迹方法检测同孕周正常孕妇和早发型及晚发型子痫前期患者胎盘组织中LOX-1和凋亡相关基因Caspase-3、Bax及Bcl-2的表达;以妊娠32周作为早发型子痫前期的界定标准.结果 早发型子痫前期20周+1～24周、24周+1～28周、28周+1～32周孕妇胎盘组织中LOX-1蛋白表达水平灰度值分别为27.6±1.3、29.4±1.4、32.3±1.7,正常妊娠20周+1～24周、24周+1～28周、28周+1～32周LOX-1表达水平分别为11.2±0.6、18.7±1.0、25.5 4±1.6,两组比较均P<0.05;晚发型子痫前期32周+1～36周、36周+1～40周孕妇胎盘组织中LOX-1蛋白表达水平分别为29.3 ±1.5、32.3±1.3,正常妊娠32周+1～36周、36周+1～40周LOX-1表达水平分别为28.1±1.8、31.3±1.6,两组比较均P>0.05.早发型子痫前期20周+1～24周、24周+1～28周、28周+1～32周孕妇胎盘组织中Caspase-3蛋白表达水平分别为17.4±0.9、23.2±1.1、28.4±0.8,正常妊娠20周+1～24周、24周+1～28周、28周+1～32周Caspase-3表达水平分别为8.5 ±1.0、11.3±1.1、14.4±1.2,两组比较均P<0.05;晚发型子痫前期32周+1～36周、36周+1～40周孕妇胎盘组织中Caspase-3蛋白表达水平分别为29.3±0.5、33.3±1.1,正常妊娠32周+1～36周、36周+1～40周Caspase-3表达水平分别为22.4 ±1.5、27.2±1.3,两组比较均P<0.05.结论 oxLDL受体LOX-1可能与早发型子痫前期的发病有关。

目的 应用SNP芯片检测食管不典型增生和早期食管鳞癌全基因组的DNA拷贝数异常和杂合性缺失(LOH),探讨它们的变化特征.方法 应用Affymetrix GeneChip Human Mapping250K NspArray芯片检测1例原发性食管重度不典型增生和4例原发性早期食管鳞癌病变组织和配对正常食管组织的DNA拷贝数的变化和LOH.结果 食管重度不典型增生只有极少数的DNA片段发生扩增,未发生缺失或LOH.早期食管鳞癌发生DNA扩增的染色体有1p、1q、2p、2q、3q、4q、5p、6p、6q、7q、8q、11p、11q、12p、12q、14q、17q、18p、19q、20q、22q和X;发生DNA缺失的染色体有1p、2q、3p、3q、4p、4q、8p、9p、9q、10q、11p、13q、16p、18q、19p、19q和22q;发生LOH的染色体有3q和9q.其中1p、19q、4q、11p等染色体发生扩增和3q、11p、2q、16p等染色体发生缺失罕见报道.结论 食管重度不典型增生DNA的变异不明显;早期食管鳞癌DNA发生明显的扩增和缺失,但很少发生LOH.250K SNP芯片能够有效地检测食管不典型增生和早期食管鳞癌全基因组范围DNA拷贝数的变化及LOH,分辨率高,定位精确,这些结果为进一步定位筛选和克隆与早期食管鳞癌相关的基因提供了重要的理论信息。

目的 观察双氢青蒿素对体外培养的卵巢上皮癌细胞黏附、迁移和侵袭能力的影响,并探讨相关的分子作用机制.方法 以不用药物处理的SKOV3和OVCAR3卵巢上皮癌细胞为对照组,利用基质胶贴壁黏附法检测双氢青蒿素(研究组)对癌细胞体外黏附能力的影响,用跨膜小室模型检测双氢青蒿素对癌细胞迁移和侵袭能力的影响.用Western印迹和RT-PCR法分别检测双氢青蒿素对癌细胞聚焦黏附激酶(FAK)磷酸化的影响以及对基质金属蛋白酶(MMP)及其组织抑制因子(TIMP)表达的影响.结果 (1)与对照组相比,双氢青蒿素使SKOV3和OVCAR3细胞的体外黏附能力分别降低76.1%和57.9%(P<0.05),迁移能力降低59.3%和69.7%(P<0.05).(2)SKOV3和OVCAR3细胞的侵袭能力弱,双氢青蒿素对其侵袭能力无明确抑制作用.(3)与对照组比较,双氢青蒿素分别使SKOV3和OVCAR3细胞FAK蛋白磷酸化水平降低42.9%和44.8%(P<0.05).(4)SKOV3和OVCAR3细胞中未检测到MMP9的表达,双氢青蒿素能诱导TIMP1的表达,对MMP2和TIMP2的表达无影响.结论 双氢青蒿素对卵巢上皮癌细胞侵袭能力的影响不明显,但能抑制其黏附和迁移能力,后两者可能与药物抑制癌细胞FAK的磷酸化水平有关。

目的 以分化后人胚胎干细胞为材料,建立仿人类早期胚胎血管发生的芽生类胚体模型.方法 将未分化人胚胎干细胞以类胚体(EB)的形式诱导分化,再以不同的血管生成刺激因子作用于类胚体、进行芽生类胚体的二次诱导,摸索芽生类胚体的最佳培养条件;并以LDL吞噬法、免疫荧光抗体标记以及培养体系中加入血管生成抑制因子等方法检测芽生类胚体中是否存在人胚胎干细胞分化后的早期血管内皮细胞.结果 (1)分化第11天的类胚体已能够在胶原基质中形成芽状分支,彼此间还能互相连接形成网络状结构.(2)在含有血管内皮生长因子(VEGF)、酸性成纤维细胞生成因子(FGF)的胶原基质中,从EB中伸展出的芽状分支能吞噬Dil-AcLDL、表达CD31、具有类似于血管腔的三维中空结构,称为芽生EB.刺激芽生EB发生的细胞因子最佳浓度为:VEGF50ng/ml,FGF 100 ng/nd.(3)芽生EB间的网络状结构,能被血管生成抑制因子内皮抑素和PF4抑制.结论 芽状结构中含有由人胚胎干细胞分化而来的内皮细胞,芽生EB是研究人类胚胎发育过程中早期胚胎血管生成的一种模型。

目的 研究内毒素耐受(endotoxin tolerance,ETT)及正常大鼠接受D-胺基半乳糖(D-galactosamine,D-GaiN)/脂多糖(lipopolysacharide,LPS)刺激后肝组织细胞因子信号转导抑制因子(SOCSs)基因表达的异同,探讨内毒素耐受的可能机制.方法 雄性SD大鼠随机分为急性肝功能衰竭模型组(acute liver failure,ALF组)和内毒素耐受组(ETT组).ETT组及ALF组先分别以0.1mg/kg LPS和生理盐水腹腔注射,每日1次,连续5次,于LPS或生理盐水第5次注射24 h后同时腹腔注射D-GaIN 800 ms/kg和LPS 8μg/只,分别在注射D-GaIN/LPS前(0 h)和注射后2.6、12、24和48 h 6个时间点留取大鼠血及肝脏标本.HE染色及透射电镜下观察肝组织病理及超微结构变化;RT-PCR法检测动物肝组织中SOCS1和SOCS3 mRNA表达;采用鲎试剂基质显色法测定血清内毒素水平,ELISA法检测TNF-α水平.结果 ETT组大鼠肝组织病理改变及超微结构变化明显轻于ALF组,其血清内毒素、TNF-α水平明显低于ALF组.内毒素:6 h组分别为1.11±0.38和0.74±0.22,24h组分别为1.12±0.24和0.86±0.21,均P<0.05,12 h组分别为1.88±0.35和0.62±0.16,48 h组分别为1.10±0.13和0.84±0.19,均P<0.01.TNF-α:6 h组分别为86.9±12.6和70.0±12.8,P<0.05,12 h组分别为77.0±18.1和48.8 ±12.8,24 h组分别为63.8±9.2和39.1±5.7,48 h组分别为53.2±8.3和38.2±9.9,均P<0.01.ALF组大鼠肝组织SOCS1和SOCS3 mRNA表达均明显上调,造模后2 h即明显高于对照组,分别于12 h、6 h达峰值,ETT组的SOCS1和SOCS3 mRNA表达较模型组明显上升.SOCS1:6 h组分别为0.955±0.186和1.349±0.390,48 h组分别为0.766±0.145和0.970±0.205,均P<0.05,2 h组分别为0.554±0.164和0.841±0.175,12 h组分别为1.130±0.181和1.888±0.573,24 h组分别为0.990±0.212和1.550±0.439,均P<0.01.SOCS3:6h组分别为0.914±0.054和1.039±0.109,12 h组分别为0.781±0.044和0.863±0.063,均P<0.05,2 h组分别为0.681±0.139和0.898±0.058,24 h组分别为0.700±0.065和0.811±0.055,均P<0.01.结论 内毒素耐受时,大剂量的D-GalN和LPS腹腔注射引起的肝脏损害减轻,内毒素、TNF-α释放减少,可能与肝组织SOCS1、SOCS3的高表达有关。

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)可由肺自身的病变引起,如重度肺挫伤、胃内容物的误吸、肺脂肪栓塞等;也可由肺外因素引发,如急性胰腺炎、挤压综合征及重度感染、休克等.多发伤并发ARDS的患者常病情严重,复杂,治疗难度大.我们就收治的多发伤合并急性呼吸窘迫综合征资料作一探讨。

会阴是躯干的一部分,位于盆膈的最底部.临床所指的女性会阴通常为位于阴道口与肛门之间的软组织.会阴由皮肤和会阴体(即会阴中心腱)组成.会阴体为由外到内逐渐变窄的楔形纤维肌性组织,Shafik等[1]对埃及的46具成人尸体(26具为男性,17具为女性)的研究发现,成人会阴体平均长度为(2.3±0.7)cm,范围1.8～3.3 cm;平均宽度(2.1±0.6)cm,范围1.5～3.2 cm;平均厚度为(0.9±0.1)cm,范围0.7～1.2 cm。

糖尿病是最常见的慢性病之一,其发病率呈逐年上升趋势,医学研究人员一直致力于寻找更多的预防糖尿病的有效方法。

患者男,32岁.因咳嗽、气喘于2004年行胸部X线示"双肺纹理增重,右肺上野及双肺中下野内带示不规则片絮状阴影"(图1);胸部CT示"双肺密度均匀增高,沿胸壁下可见片状弧形毛玻璃样改变,部分呈地图样改变"(图2),诊断为肺泡蛋白沉积症(PAP).2007年10月出现头痛阵发性加剧,伴有恶心、呕吐及右侧肢体无力,无发热.体格检查:右侧肢体肌力Ⅳ级,病理征阴性,脑膜刺激征阳性。